二抗選擇具體過程

1.     針對一抗的宿主來源選擇：二抗指向一抗的物種

2.針對一抗的類別亞型的選擇： 二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。

3.二抗的種屬來源：除雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)以外，一般來說，不同的種屬來源與二抗的質(zhì)量沒有必然的聯(lián)系，來源于山羊的二抗與來源于驢的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒有太多的差別。

4.二抗的耦聯(lián)標(biāo)記：針對不同的實(shí)驗(yàn)方法選擇不同的標(biāo)記，一般來講，耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP)，熒光基團(tuán)(FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等)、生物素、金顆粒。一般做WB、 ELISA、 IHC等實(shí)驗(yàn)都是推薦HRP標(biāo)記的二抗，做IF FC等都是FITC標(biāo)記的抗體。

5.預(yù)吸附二抗的選擇：對于于富含免疫球蛋白的組織和細(xì)胞，通常推薦使用預(yù)吸附血清的二抗于蛋白質(zhì)印跡應(yīng)用。預(yù)吸附的二抗與內(nèi)源免疫球蛋白發(fā)生相互作用的可能性較低，因此可降低非特異性背景

6.特殊要求： F(ab’)2片段形式的二抗可避免與Protein A /G或與Fc受體的結(jié)合，其分子本身比較小，更容易滲透入細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)內(nèi)而靈敏度更高 。Fab片段形式的二抗是只含有一個結(jié)合位點(diǎn)，可用來封閉內(nèi)源性的免疫球蛋白；一般無要求的都是指抗IgG H&L，這類抗體和IgG分子的重鏈和輕鏈都可以反應(yīng)，也可以和其他的免疫球蛋白家族（IgM，IgA，IgD,IgE）和亞家族反應(yīng)，因?yàn)樗械拿庖咔虻鞍锥加邢嗤妮p鏈.