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血清質量鑒定與防揮發(fā)的方法
一 、鑒定的方法
1、理化性質:蛋白含量包括血清總蛋白含量、球蛋白含量、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一項非常重要的指標,血清中球蛋白主要是抗體,球蛋白含量越低血清質量越高。血紅蛋白也是越低越好。
2、微生物檢測:對支原體、病毒的檢測,支原體是一種很小的微生物,可通過孔徑22u的濾膜。支原體、病毒污染在光學顯微鏡下難于察覺,細胞也能生長繁殖,但會影響實驗結果。
3、促生長效果:這是血清重要的特性,應當以培養(yǎng)的細胞來檢測。
4、對于使用者:判斷血清質量先從外觀入手。好的血清應該是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或極少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁、不透明、含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質變性;若血清呈棕紅色,說明血清中的血紅蛋白含量太高,取材時有溶血現(xiàn)象。
二、防發(fā)揮的方法
1、使用前:必須滅活處理,56℃30分鐘。對于一些品質高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細胞培養(yǎng)。
2、儲存條件:一般儲存于-20℃,同時應避免反復凍融。購買大包裝的血清后,首先要滅活處理,然后分裝成小包裝,儲存于-20℃,使用前融化。融化時現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時間存放,應盡快使用。
3、使用濃度:自從有了合成培養(yǎng)基,血清就是作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用,使用濃度一般為5-20%,*常用是10%。過多血清容易使培養(yǎng)中的細胞發(fā)生變化,特別是一些二倍體的無限細胞系,迅速生長之后容易發(fā)生惡性轉化。
采購血清時,先從供應商處索取樣品進行試驗,選定一批后就要保留足夠使用6個月至1年的量,直至用另一批經(jīng)過預先試驗的樣品代替。
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