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更新時間：2024-04-08 
瀏覽次數：151綿羊神經營養(yǎng)因子4(NT-4) ELISA 試劑盒
ELISA 試劑盒檢測原理：
篤瑪生物（DUMABIO）生產的ELISA試劑盒采用抗體夾心法:將抗某蛋白抗體包被于酶標板上，標本和標準品中的某蛋白與抗體結合，加入化的抗某蛋白抗體，再加入SABC復合物與抗體結合，形成免疫復合物，然后加入TMB顯色底物，顯色劑顯藍色，zui候加終止液變黃色，游離的成分被洗去。在450 nm處測OD值，某蛋白濃度與OD值之間呈正比，可通過繪制標準曲線計算出標本中某蛋白的濃度。
96T/48T 人白介素1β前體(pro-IL1β) ELISA 試劑盒說明書
ELISA 試劑盒試劑盒組分: （保存溫度2-8℃）
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
密封袋 | 1個 | 1個 | |
封板膜 | 12孔×4條 | 2片（96） | 2-8℃保存 |
微孔酶標板 | 1×48 | 12孔×8條 | 2-8℃保存 |
標準品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 2-8℃保存 |
標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶標試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
96T/48T 人白介素1β前體(pro-IL1β) ELISA 試劑盒說明書
本試劑盒用于血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)上清液及其它生物體液。
ELISA 試劑盒標本收集與試劑準備:
1. 血清、血漿樣本收集應使用一次性的無熱原，無內毒素試管（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝均可），血清、血漿避免使用溶血，高血脂標本，標本懸浮物應離心去除，使標本清澈透明。待測樣本應盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-80℃）保存，避免反復凍融。
2. 洗滌液配置：用蒸餾水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的蒸餾水）
3. 標準品配制：取7個1.5ml離心管，分別標注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。從第壹至七管中分別加入標準品/樣品稀釋液200ul。在第壹管中加入標準品溶液200ul，置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出200ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第六管中吸出200ul棄去，第七管為空白對照。
4.
5. 化抗體工作液配置:使用前20分鐘，用化抗體稀釋液將100×化抗體稀釋成1×工作液，根據所需用量配置，當日使用，剩余棄之。
6. TMB顯色液的配置：使用分鐘，將TMB顯色液A液和B液1：1混合，避光放置備用。
7. 如果您檢測的樣本中靶蛋白濃度高于標準品zui糕值，建議重新檢測，請根據實際情況，適當倍數稀釋(建議做預實驗，以確定稀釋倍數)。
ELISA 試劑盒檢測程序:
1. 加樣：空白孔加入50μl標準品/樣品稀釋液，其余孔各加入標準品或待測樣品50ul，將反應板混勻后置37℃，40分鐘。
2. 洗板：用1×洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震蕩/浸泡1-2分鐘，向濾紙上印干。
3. 空白孔加入100ul化抗體稀釋液，其余孔各加入1×的化抗體工作液100ul，混勻后置37℃，30分鐘。
4. 洗板：同上。
5. 每孔加入SABC復合物工作液100ul，混勻后置37℃，20分鐘。
6. 洗板：同上。
96T/48T 人白介素1β前體(pro-IL1β) ELISA 試劑盒說明書
7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混勻后置37 ℃暗處反應10-20分鐘（具體顯色時間根據顯色結果而定）。
8. 每孔加入100ul終止液，混勻，30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
ELISA 試劑盒結果判斷與計算：
1. 所有OD值建議減除空白值后再行計算，如空白OD低于0.1，也可以直接計算。
2. 以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，手工繪制或用軟件繪制標準曲線，根據樣品OD值計算出相應含量，再乘上稀釋倍數即可。
ELISA 試劑盒試劑盒性能:
1、 檢測范圍:15.6-1000pg/mL
2、 特異性:同時可檢測重組或天然的某種蛋白或抗體，不與其它細胞因子有交叉反應。
3、 重復性:板內，板間變異系數均小于10%。
ELISA 試劑盒注意事項
1. 在試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙孔檢測，每次檢測都應做標準曲線。
2. 洗滌過程很關鍵，洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高，從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能 有結晶,屬于正?，F(xiàn)象，37℃水浴使結晶溶解后再配制洗滌液。
3. 檢測時所有試劑都要恢復到室溫，板條開封后剩余板條需封好，放回袋中2 個月內用完。
4. 試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過深會出現(xiàn)絮狀物，屬正?，F(xiàn)象，不影響結果判讀。
5. 只用于科研，不能用于臨床診斷！
試劑盒局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到精確的結果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。
綿羊神經營養(yǎng)因子4(NT-4) ELISA 試劑盒
LISA試劑盒技術流程
雙抗體夾心法(檢測未知抗原) | 間接法(檢測未知抗體) |
1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次。 2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。 3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。 4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。 5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml 6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。 | 1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。 2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照) 3、加酶標抗體：于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,最后一遍用DDW洗滌。 4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。 5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml 6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。 |
技術提示：
1、混合蛋白溶液時，避免起泡。
2、加校準品與樣本時，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，
公共組分應該懸臂加樣，避免交叉污染。
3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結果準確性的必要條件。
4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經失效，不得使用。
5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產物，會瞬間變?yōu)辄S色。
6、實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。
8、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。
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