土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）活性檢測(cè)試劑盒說明書

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

微量法

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2mL丙酮溶解，用不完的試劑仍-20℃保存； 試劑三：液體30mL×1 瓶，4℃保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，5 mmol/L的對(duì)硝基苯酚溶液，4℃保存。臨用前用試劑一將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋50倍得100μmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

產(chǎn)品說明：

土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）是土壤微生物分泌的溶酶體中的一種酸性水解酶。其活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。

S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對(duì)-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算NAG活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰、30-50目篩（或更小）和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30-50目篩。二、測(cè)定步驟：

（1） 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，波長調(diào)至400nm，蒸餾水調(diào)零。

（2） 加樣表：

三、S-NAG 活力計(jì)算：

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol  對(duì)硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。

S-NAG活力（U/g 土樣）＝ΔA÷ (ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V 反總÷W÷T =0.432× ΔA÷ ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W。T： 反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V  反總：反應(yīng)體系總體積：1.8×10-4  L；C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，100μmol/L；

W：樣本質(zhì)量。

注意事項(xiàng)：

1、當(dāng)ΔA 大于 1 時(shí)，建議將上清液稀釋后進(jìn)行測(cè)定；當(dāng)ΔA 小于 0.02 時(shí)，建議延長反應(yīng)時(shí)間。計(jì)算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)或注意反應(yīng)時(shí)間變化。