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土壤亮氨酸氨基肽酶(S-LAP)活性檢測(cè)試劑盒說明書
注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。貨號(hào):DM-W-S-LAP
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體30mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃避光保存;臨用前加入3mL丙酮溶解。
產(chǎn)品說明:
微量法
S-LAP是一類能水解肽鏈N-末端為亮氨酸的酶,由土壤微生物分泌。S-LAP活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。
S-LAP分解L-亮氨酸對(duì)硝基苯胺生成對(duì)硝基苯胺,后者在405nm有最大吸收峰,通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算S-LAP活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、甲苯、丙酮、30目篩(或更小)。
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,波長(zhǎng)調(diào)至405nm,蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表:
測(cè)定管 | 對(duì)照管 | |
土樣(g) | 0.03 | 0.03 |
甲苯(µL) | 15 | 15 |
震蕩混勻,室溫靜置15min。 | ||
試劑一(µL) | 255 | 255 |
試劑二(µL) | 30 | - |
30℃水浴反應(yīng)1h后立刻煮沸5min。流水冷卻至室溫。 | ||
試劑二(µL) | - | 30 |
14000g 常溫離心10min,取200µL上清于405nm處測(cè)定吸光值,分別記為A測(cè)定管、A對(duì)照管,計(jì)算?A=A測(cè)定管-A對(duì)照顧管。 |
三、酶活計(jì)算公式
1. 按微量比色皿計(jì)算:
酶活性定義:每克土壤每分鐘生成1nmol 對(duì)硝基苯胺為一個(gè)酶活力單位。
S-LAP 活性(U/g)=△A÷(ε×d) ×109×V反總÷W÷T=0.507×△ A÷W 。
ε:對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù):9.87×103 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V 反總:反應(yīng)總體積,300µL=3×10-4 L;W:土樣質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,60min;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol。
2. 按96孔板計(jì)算:
酶活性定義:每克土壤每分鐘氧化1nmol 對(duì)硝基苯胺為一個(gè)酶活力單位。
S-LAP 活性(U/g)=△A÷(ε×d) ×109×V反總÷W÷T=0.844×△ A÷W 。
ε:對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù):9.87×103 L/mol/cm;d:96 孔板光徑,0.6cm;V 反總:反應(yīng)總體積,300µL=3×10-4 L;W:土樣質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,60min;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol。
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