人 CD80 分子（CD80）ELISA 試劑盒

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人 CD80 分子（CD80）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的人 CD80 分子（CD80）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

試劑盒組成

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、5、10、20、40、80 ng/ml

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

人 CD80 分子（CD80）ELISA 試劑盒

操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

4.  嚴(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1. 準(zhǔn)備工作

（1）將試劑盒從冰箱中取出，放置至室溫；

（2）準(zhǔn)備所需的試劑和樣品；

（3）將酶標(biāo)板用洗滌液清洗干凈。

2. 包被抗原

（1）將抗原按照說(shuō)明書要求稀釋后，加入酶標(biāo)板孔中，每孔100μL；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使抗原充分覆蓋酶標(biāo)板孔底部；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，4℃孵育過(guò)夜。

3. 洗滌和干燥

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時(shí)間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標(biāo)板表面的水分。

4. 加樣和孵育

（1）在每個(gè)酶標(biāo)板孔中加入100μL待測(cè)血清；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使血清充分覆蓋抗原；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育1小時(shí)。

5. 洗滌和干燥

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時(shí)間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標(biāo)板表面的水分。

6. 加酶標(biāo)抗體

（1）在每個(gè)酶標(biāo)板孔中加入100μL酶標(biāo)抗體；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使酶標(biāo)抗體充分覆蓋抗原；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育1小時(shí)。

7. 洗滌和干燥

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時(shí)間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標(biāo)板表面的水分。

8. 加底物顯色

（1）在每個(gè)酶標(biāo)板孔中加入100μL底物溶液；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使底物溶液充分覆蓋抗原；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育15-30分鐘。

9. 終止反應(yīng)并測(cè)量吸光度值

（1）在每個(gè)酶標(biāo)板孔中加入50μL終止液；

（2）立即用酶標(biāo)儀測(cè)量各孔的吸光度值。

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2.  靈敏度：檢測(cè)濃度小于1.0 ng/ml。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2.   嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。