人雙載蛋白(AMPH) ELISA 試劑盒

試劑盒組成

操作步驟

1. 準(zhǔn)備工作

（1）將試劑盒從冰箱中取出，放置至室溫；

（2）準(zhǔn)備所需的試劑和樣品；

（3）將酶標(biāo)板用洗滌液清洗干凈。

2. 包被抗原

（1）將抗原按照說明書要求稀釋后，加入酶標(biāo)板孔中，每孔100μL；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使抗原充分覆蓋酶標(biāo)板孔底部；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，4℃孵育過夜。

3. 洗滌和干燥

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標(biāo)板表面的水分。

4. 加樣和孵育

（1）在每個酶標(biāo)板孔中加入100μL待測血清；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使血清充分覆蓋抗原；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育1小時。

5. 洗滌和干燥

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標(biāo)板表面的水分。

6. 加酶標(biāo)抗體

（1）在每個酶標(biāo)板孔中加入100μL酶標(biāo)抗體；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使酶標(biāo)抗體充分覆蓋抗原；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育1小時。

7. 洗滌和干燥

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標(biāo)板表面的水分。

8. 加底物顯色

（1）在每個酶標(biāo)板孔中加入100μL底物溶液；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使底物溶液充分覆蓋抗原；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育15-30分鐘。

9. 終止反應(yīng)并測量吸光度值

（1）在每個酶標(biāo)板孔中加入50μL終止液；

（2）立即用酶標(biāo)儀測量各孔的吸光度值。

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)），OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

人雙載蛋白(AMPH) ELISA 試劑盒  

實驗注意事項

1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 濃度為 0 的標(biāo)準(zhǔn)品可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本最終濃度。

4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

6. 若中英文說明書有誤，請以中文說明書為準(zhǔn)。

7. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

8. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

試劑盒性能：

1. 檢測范圍：1.95 nmol/L –100 nmol/L。

2. 靈敏度：檢測濃度小于0.78 nmol/L。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

合作單位:

中國醫(yī)科大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、北京大學(xué)、貴陽醫(yī)學(xué)院、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)

天津疾控中心、江南大學(xué)、山東大學(xué)、青島大學(xué)、香港大學(xué)

云南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院