人可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL) ELISA 試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

    ELISA運(yùn)用了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色原理，需要將抗原或抗體預(yù)包被在固相載體表面，使后來(lái)形成的抗原-抗體-酶 (熒光基團(tuán)) -底物復(fù)合物黏附在載體上，通過(guò)檢測(cè)OD值或發(fā)光值，來(lái)檢測(cè)靶蛋白的含量。

實(shí)驗(yàn)所需自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

試劑盒組成

操作步驟

 人可溶性核因子κB受體活化因子配基試劑盒

1. 準(zhǔn)備工作：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘，使試劑盒恢復(fù)至室溫。同時(shí)準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需的材料和器具。
2. 加樣：在酶標(biāo)板的弟1個(gè)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL，然后在后續(xù)的孔中依次加入待測(cè)樣本50μL。
3. 溫育：將酶標(biāo)板密封，在37℃下溫育30分鐘。
4. 洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內(nèi)液體。
5. 加酶：在每個(gè)孔中加入酶標(biāo)物100μL。
6. 溫育：再次將酶標(biāo)板密封，在37℃下溫育30分鐘。
7. 洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內(nèi)液體。
8. 加底物：在每個(gè)孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。
9. 終止反應(yīng)：在每個(gè)孔中加入終止液50μL。
10. 檢測(cè)：用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下讀取各孔的吸光度（OD值）。

 人可溶性核因子κB受體活化因子配基試劑盒

結(jié)果分析

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計(jì)算出樣本中角蛋白1（KRT1）的濃度。具體分析方法可參考試劑盒說(shuō)明書(shū)或相關(guān)文獻(xiàn)。

注意事項(xiàng)

1. 在操作過(guò)程中，應(yīng)保持酶標(biāo)板的干燥，避免水分進(jìn)入孔內(nèi)。
2. 加樣時(shí)需確保加樣準(zhǔn)確、無(wú)氣泡產(chǎn)生。
3. 溫育和洗滌過(guò)程中需嚴(yán)格控制時(shí)間和溫度，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4. 在使用酶標(biāo)儀讀取OD值時(shí)，需確保波長(zhǎng)設(shè)置正確，避免誤差產(chǎn)生。
5. 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，需保持操作環(huán)境的清潔和整潔，避免交叉污染。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。