實(shí)驗(yàn)原理

1. 抗體或抗原的吸附：將待測(cè)抗原或抗體吸附到固相載體上，常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團(tuán)，能夠與待測(cè)抗原或抗體特異性結(jié)合。

2. 酶標(biāo)記的抗體或抗原的結(jié)合：將酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)抗原或抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力，能夠與待測(cè)抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。

3. 底物顯色反應(yīng)：當(dāng)酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時(shí)，酶能夠催化底物分解，產(chǎn)生顏色變化。通過(guò)測(cè)量顏色的變化程度，可以判斷待測(cè)抗原或抗體的濃度。

實(shí)驗(yàn)所需自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

試劑盒組成

操作步驟

ADAMTS12 ELISA 試劑盒 

1. 準(zhǔn)備工作：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘，使試劑盒恢復(fù)至室溫。同時(shí)準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需的材料和器具。
2. 加樣：在酶標(biāo)板的弟1個(gè)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL，然后在后續(xù)的孔中依次加入待測(cè)樣本50μL。
3. 溫育：將酶標(biāo)板密封，在37℃下溫育30分鐘。
4. 洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內(nèi)液體。
5. 加酶：在每個(gè)孔中加入酶標(biāo)物100μL。
6. 溫育：再次將酶標(biāo)板密封，在37℃下溫育30分鐘。
7. 洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內(nèi)液體。
8. 加底物：在每個(gè)孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。
9. 終止反應(yīng)：在每個(gè)孔中加入終止液50μL。
10. 檢測(cè)：用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下讀取各孔的吸光度（OD值）。

結(jié)果分析

1. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

2. 推薦使用專(zhuān)業(yè)的曲線(xiàn)制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的擬合方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。 

注意事項(xiàng)

A 仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。

B 檢查試劑盒標(biāo)簽上的有效期。如果超過(guò)有效期，請(qǐng)勿使用。

C 按說(shuō)明書(shū)確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）。

D 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存。

E 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，（比如移液器，試管，清洗器，酶標(biāo)儀）。

F 按說(shuō)明書(shū)將所用試劑平衡至室溫，根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。

G 檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件，保證所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)推薦的條件存儲(chǔ)。

H 檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液（比如沉淀或變色）。有些試劑，比如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或者檢測(cè)稀釋液，可能在設(shè)計(jì)時(shí)就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標(biāo)板之前，必需充分混勻。而由于沉淀物的特性，在加入酶標(biāo)板之前，必需不停攪拌。

I 保證充分的孵育時(shí)間和溫度。

J 切勿使用不同生產(chǎn)批號(hào)的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。

K 在混合或溶解蛋白溶液時(shí)，避免泡沫產(chǎn)生。

L 在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前，安排好實(shí)驗(yàn)流程。

M 在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前，清潔工作臺(tái)。

N 若有問(wèn)題，應(yīng)與我公司或代理商的技術(shù)支持聯(lián)系

ADAMTS12 ELISA 試劑盒 

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。