人成纖維細(xì)胞激活蛋白α(FAPα) ELISA 試劑盒 

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒采用間接酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定標(biāo)本中人成纖維細(xì)胞激活蛋白α(FAPα)水平。用純化的人成纖維細(xì)胞激活蛋白α(FAPα)抗體包被酶標(biāo)板，制成固相抗體，往包被單抗的酶標(biāo)板中依次加入人成纖維細(xì)胞激活蛋白α(FAPα)，再與HRP標(biāo)記的人成纖維細(xì)胞激活蛋白α(FAPα)抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過(guò)洗滌去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，再加入底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人成纖維細(xì)胞激活蛋白α(FAPα)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量光密度，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人成纖維細(xì)胞激活蛋白α(FAPα)濃度。

試劑、材料、樣本和緩沖液

1. 人成纖維細(xì)胞激活蛋白α(FAPα)ELISA試劑盒
2. 酶標(biāo)板、洗滌液、樣品稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品
3. 實(shí)驗(yàn)室常用儀器：移液器、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)
4. 樣本收集和處理：收集血清或血漿樣本，處理前需離心分離，避免細(xì)菌污染。

人成纖維細(xì)胞激活蛋白αELISA 試劑盒 

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋，確保準(zhǔn)確配制。
2. 加樣：分別將100μL標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本加入相應(yīng)的孔中，確保加樣均勻，避免產(chǎn)生氣泡。
3. 孵育：將酶標(biāo)板封閉，在37℃下孵育1小時(shí)，確保充分反應(yīng)。
4. 洗滌：清洗5次，每次清洗后要倒干凈液體，避免殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5. 加酶標(biāo)抗體：將50μL酶標(biāo)抗體加入每個(gè)孔中，確保加樣均勻。
6. 孵育：將酶標(biāo)板封閉，在37℃下孵育1小時(shí)，確保充分反應(yīng)。
7. 洗滌：清洗5次，每次清洗后要倒干凈液體，避免殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
8. 加底物：將50μL底物溶液加入每個(gè)孔中，確保加樣均勻。
9. 顯色：在37℃下孵育15-30分鐘，觀察顏色變化。
10. 終止反應(yīng)：加入50μL終止液，立即混勻。
11. 檢測(cè)：用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)量光密度，記錄數(shù)據(jù)。

結(jié)果分析

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和對(duì)應(yīng)的OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人成纖維細(xì)胞激活蛋白α(FAPα)濃度。如果樣品濃度超過(guò)線性范圍，需要進(jìn)行稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。濃度單位為pg/mL或ng/mL。

注意事項(xiàng)

1. 試劑盒保存在2-8℃，避免反復(fù)凍融。
2. 避免直接接觸標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品，防止交叉污染。
3. 加樣時(shí)要保證加樣均勻，避免產(chǎn)生氣泡。
4. 洗滌時(shí)要保證洗滌液倒干凈，避免殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

人成纖維細(xì)胞激活蛋白αELISA 試劑盒