人轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(TNPO1) ELISA 試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒基于檢測(cè)樣本的特異性抗體包被酶標(biāo)板，加入待測(cè)樣本，樣本與包被在酶標(biāo)板上的特異性抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。清洗后加入酶標(biāo)二抗，與免疫復(fù)合物結(jié)合，形成完整的三明治復(fù)合物。再加入底物溶液，底物在酶的作用下變色，顏色的深淺與樣本的濃度呈正相關(guān)。最后加入終止液，使反應(yīng)停止，在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的光密度值（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本的濃度。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品收集與處理

（1）根據(jù)需要收集不同種類(lèi)的樣品，如血清、血漿、尿液等。

（2）對(duì)于血清和血漿樣品，將采集的血液靜置一段時(shí)間后，離心分離出血清或血漿。

（3）對(duì)于尿液樣品，收集尿液后，可直接進(jìn)行檢測(cè)。

2. 樣品稀釋

根據(jù)試劑盒說(shuō)明，對(duì)需要稀釋的樣品進(jìn)行適當(dāng)比例的稀釋。

3. 加樣

（1）按照試劑盒說(shuō)明，分別將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和待測(cè)樣品加入相應(yīng)的孔中。

（2）每孔加入50μL，輕輕震蕩混勻。

4. 封閉

根據(jù)試劑盒說(shuō)明，加入適量的封閉液，覆蓋板孔，并輕輕震蕩混勻。封閉液一般為含有一定濃度的非特異性結(jié)合配體的溶液，可以降低非特異性結(jié)合的影響。

5. 洗滌

（1）將板孔洗滌液加入到每個(gè)孔中，輕輕震蕩，然后倒掉洗滌液。重復(fù)洗滌3次，每次用洗滌液充分洗滌

（2）最后一次洗滌后，用紙巾輕輕吸干板孔表面的水分。

6. 酶標(biāo)二抗加入及孵育

（1）根據(jù)試劑盒說(shuō)明，將酶標(biāo)二抗加入相應(yīng)的孔中。

（2）孵育一定時(shí)間后，將板孔中的溶液倒掉。

7. 洗滌與顯色

（1）重復(fù)步驟5的洗滌過(guò)程。

（2）加入顯色劑，孵育一定時(shí)間后，將板孔中的溶液倒掉。

8. 終止反應(yīng)與讀數(shù)

（1）加入終止液，終止酶促反應(yīng)。

（2）用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處讀取各孔的光密度值（OD值）。

人轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(TNPO1) ELISA 試劑盒

實(shí)準(zhǔn)驗(yàn)備

        在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本，及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，有條件的，最好-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。

液體類(lèi)標(biāo)本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

1. 血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

3. 尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

5. 培養(yǎng)細(xì)胞

    檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

6. 組織標(biāo)本

    切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，

按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

免責(zé)聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或生物體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)， 本公司概不負(fù)責(zé)。

嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，不同批號(hào)不可交換使用，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

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