人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP) ELISA 試劑盒 

實驗原理

本試劑盒基于檢測樣本的特異性抗體包被酶標板，加入待測樣本，樣本與包被在酶標板上的特異性抗體結(jié)合，形成免疫復合物。清洗后加入酶標二抗，與免疫復合物結(jié)合，形成完整的三明治復合物。再加入底物溶液，底物在酶的作用下變色，顏色的深淺與樣本的濃度呈正相關(guān)。最后加入終止液，使反應(yīng)停止，在450nm波長下測量各孔的光密度值（OD值），通過標準曲線計算樣本的濃度。

檢測前準備工作

1.孔板室溫平衡1小時

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準備各型號的移液槍、槍頭、量筒

5.準備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本xi釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器

9.準備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說明書提示，溶解標準品

11.配制不同濃度的標準品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果稀釋樣本

14.準備好封板膜

人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP) ELISA 試劑盒 

操作步驟

1. 包被：將抗原溶液加入聚苯乙烯酶標板孔中，包被抗原，37℃孵育1小時。

2. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，37℃孵育30分鐘，以封閉酶標板上的非特異性結(jié)合位點。

4. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入標準品和待測樣本，37℃孵育1小時。

6. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)。

7. 加酶標抗體：加入酶標記的抗體，37℃孵育1小時。

8. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的酶標抗體。

9. 顯色：加入TMB底物溶液，37℃孵育15-30分鐘。

10. 終止反應(yīng)：加入終止液，停止顯色反應(yīng)。

11. 檢測：在450nm波長下讀取吸光度值（OD值）。

樣本處理

1.組織取出前盡量進行心臟灌流

2.組織表面不能有毛發(fā)等不相關(guān)組分

3.組織稱重(mg)后立即放入EP管中

4.向EP管中加入9倍量的PBS (μL)

5.用勻漿機進行組織勻漿

6.離心

7.小心吸取上清

植物樣本處理

植物組織的提取，不管是根莖組織還是葉片組織還是果實組織，都應(yīng)該采用鮮重的計重方式，一般要遵循以下原則：

    1.稱取的組織重量不能低于50mg。

    2.勻漿的比例按照10%，即1g組織加9ml的勻漿液，勻漿液一般選取PBS(PH=7.2-7.4)

    3.組織在勻漿器勻漿過程中，勻漿液應(yīng)該分2次加進去，這樣勻漿更充分。

    4.充分勻漿完成后離心取上清，離心機的轉(zhuǎn)數(shù)選取2000-3000轉(zhuǎn)每分，轉(zhuǎn)數(shù)不宜超過5000.離心時間為15-30分鐘。

相關(guān)產(chǎn)品