人脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2(LpPLA2) ELISA 試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒基于檢測(cè)樣本的特異性抗體包被酶標(biāo)板，加入待測(cè)樣本，樣本與包被在酶標(biāo)板上的特異性抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。清洗后加入酶標(biāo)二抗，與免疫復(fù)合物結(jié)合，形成完整的三明治復(fù)合物。再加入底物溶液，底物在酶的作用下變色，顏色的深淺與樣本的濃度呈正相關(guān)。最后加入終止液，使反應(yīng)停止，在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的光密度值（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本的濃度。

檢測(cè)前準(zhǔn)備工作

1.孔板室溫平衡1小時(shí)

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準(zhǔn)備各型號(hào)的移液槍、槍頭、量筒

5.準(zhǔn)備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本xi釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器

9.準(zhǔn)備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說明書提示，溶解標(biāo)準(zhǔn)品

11.配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果稀釋樣本

14.準(zhǔn)備好封板膜

人脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2ELISA 試劑盒

操作步驟

1. 包被：將抗原溶液加入聚苯乙烯酶標(biāo)板孔中，包被抗原，37℃孵育1小時(shí)。

2. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，37℃孵育30分鐘，以封閉酶標(biāo)板上的非特異性結(jié)合位點(diǎn)。

4. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本，37℃孵育1小時(shí)。

6. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)。

7. 加酶標(biāo)抗體：加入酶標(biāo)記的抗體，37℃孵育1小時(shí)。

8. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。

9. 顯色：加入TMB底物溶液，37℃孵育15-30分鐘。

10. 終止反應(yīng)：加入終止液，停止顯色反應(yīng)。

11. 檢測(cè)：在450nm波長(zhǎng)下讀取吸光度值（OD值）。

樣本處理

1.組織取出前盡量進(jìn)行心臟灌流

2.組織表面不能有毛發(fā)等不相關(guān)組分

3.組織稱重(mg)后立即放入EP管中

4.向EP管中加入9倍量的PBS (μL)

5.用勻漿機(jī)進(jìn)行組織勻漿

6.離心

7.小心吸取上清

人脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2ELISA 試劑盒

植物樣本處理

植物組織的提取，不管是根莖組織還是葉片組織還是果實(shí)組織，都應(yīng)該采用鮮重的計(jì)重方式，一般要遵循以下原則：

    1.稱取的組織重量不能低于50mg。

    2.勻漿的比例按照10%，即1g組織加9ml的勻漿液，勻漿液一般選取PBS(PH=7.2-7.4)

    3.組織在勻漿器勻漿過程中，勻漿液應(yīng)該分2次加進(jìn)去，這樣勻漿更充分。

    4.充分勻漿完成后離心取上清，離心機(jī)的轉(zhuǎn)數(shù)選取2000-3000轉(zhuǎn)每分，轉(zhuǎn)數(shù)不宜超過5000.離心時(shí)間為15-30分鐘。

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