人核心蛋白聚糖(DCN) ELISA 試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

1. 抗原抗體反應(yīng)

ELISA試劑盒中的抗原或抗體被固定在固相載體上，當(dāng)加入待測(cè)樣本時(shí)，樣本中的抗原或抗體與固相載體上的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物。

2. 酶標(biāo)記物的結(jié)合

將酶標(biāo)記物與特異性抗體或抗原結(jié)合，形成酶標(biāo)記抗體或抗原。酶標(biāo)記物在反應(yīng)中起到催化作用，加速反應(yīng)進(jìn)程，提高檢測(cè)靈敏度。

3. 酶促反應(yīng)

在酶標(biāo)記物與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合后，加入底物溶液，底物在酶的催化下發(fā)生氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化。顏色深淺與待測(cè)樣本中的抗原或抗體濃度成正比。

4. 吸光度檢測(cè)

將反應(yīng)體系中的吸光度進(jìn)行測(cè)量，通過(guò)比較標(biāo)準(zhǔn)品溶液與待測(cè)樣本溶液的吸光度值，即可計(jì)算出待測(cè)樣本中的抗原或抗體濃度。

試劑盒組成

準(zhǔn)備工作

1.孔板室溫平衡1小時(shí)

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準(zhǔn)備各型號(hào)的移液槍、槍頭、量筒

5.準(zhǔn)備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本xi釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器

9.準(zhǔn)備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說(shuō)明書(shū)提示，溶解標(biāo)準(zhǔn)品

11.配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果稀釋樣本

14.準(zhǔn)備好封板膜

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品收集與處理

（1）根據(jù)需要收集不同種類(lèi)的樣品，如血清、血漿、尿液等。

（2）對(duì)于血清和血漿樣品，將采集的血液靜置一段時(shí)間后，離心分離出血清或血漿。

（3）對(duì)于尿液樣品，收集尿液后，可直接進(jìn)行檢測(cè)。

2. 樣品稀釋

根據(jù)試劑盒說(shuō)明，對(duì)需要稀釋的樣品進(jìn)行適當(dāng)比例的稀釋。

3. 加樣

（1）按照試劑盒說(shuō)明，分別將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和待測(cè)樣品加入相應(yīng)的孔中。

（2）每孔加入50μL，輕輕震蕩混勻。

4. 封閉

根據(jù)試劑盒說(shuō)明，加入適量的封閉液，覆蓋板孔，并輕輕震蕩混勻。封閉液一般為含有一定濃度的非特異性結(jié)合配體的溶液，可以降低非特異性結(jié)合的影響。

5. 洗滌

（1）將板孔洗滌液加入到每個(gè)孔中，輕輕震蕩，然后倒掉洗滌液。重復(fù)洗滌3次，每次用洗滌液充分洗滌

（2）最后一次洗滌后，用紙巾輕輕吸干板孔表面的水分。

6. 酶標(biāo)二抗加入及孵育

（1）根據(jù)試劑盒說(shuō)明，將酶標(biāo)二抗加入相應(yīng)的孔中。

（2）孵育一定時(shí)間后，將板孔中的溶液倒掉。

7. 洗滌與顯色

（1）重復(fù)步驟5的洗滌過(guò)程。

（2）加入顯色劑，孵育一定時(shí)間后，將板孔中的溶液倒掉。

8. 終止反應(yīng)與讀數(shù)

（1）加入終止液，終止酶促反應(yīng)。

（2）用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處讀取各孔的光密度值（OD值）。

人核心蛋白聚糖(DCN) ELISA 試劑盒

結(jié)果判斷

1. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

2. 推薦使用專(zhuān)業(yè)的曲線(xiàn)制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的擬合方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。 

相關(guān)產(chǎn)品

免責(zé)聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或生物體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)， 本公司概不負(fù)責(zé)。

嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，不同批號(hào)不可交換使用，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。