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猴纖蛋白原(FG)酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒
本試劑盒基于檢測(cè)樣本的特異性抗體包被酶標(biāo)板,加入待測(cè)樣本,樣本與包被在酶標(biāo)板上的特異性抗體結(jié)合,形成免疫復(fù)合物。清洗后加入酶標(biāo)二抗,與免疫復(fù)合物結(jié)合,形成完整的三明治復(fù)合物。再加入底物溶液,底物在酶的作用下變色,顏色的深淺與樣本的濃度呈正相關(guān)。最后加入終止液,使反應(yīng)停止,在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的光密度值(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本的濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑盒組成
名稱 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 12 孔×8 條 | 12 孔×4 條 | 無(wú) |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.5mL | 0.5mL | 按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 6mL | 3mL | 按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋 |
樣本xi釋液 | 6mL | 3mL | 按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋 |
檢測(cè)抗體 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
20×洗滌緩沖液 | 20mL | 20mL | 按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋 |
底物 A | 6mL | 3mL | 無(wú) |
底物 B | 6mL | 3mL | 無(wú) |
終止液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
封板膜 | 2 張 | 2 張 | 無(wú) |
說(shuō)明書 | 1 份 | 1 份 | 無(wú) |
自封袋 | 1 個(gè) | 1 個(gè) | 無(wú) |
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 準(zhǔn)備試劑盒:將試劑盒從冰箱中取出,室溫放置30分鐘以上,使試劑盒恢復(fù)至室溫。
2. 加樣:分別向各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和空白孔,每孔加入50μl。
3. 孵育:用封板膠紙封住反應(yīng)孔,輕輕振蕩混勻,37℃孵育1小時(shí)。
4. 洗滌:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液充分洗滌4-5次,每次30秒。
5. 加酶標(biāo)二抗:每孔加入50μl酶標(biāo)二抗溶液,輕輕振蕩混勻,37℃孵育30分鐘。
6. 洗滌:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液充分洗滌4-5次,每次30秒。
7. 加底物:每孔加入50μl底物溶液,輕輕振蕩混勻,37℃孵育15-20分鐘。
8. 終止反應(yīng):每孔加入50μl終止液,輕輕振蕩混勻。
9. 讀數(shù):用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處讀取各孔的光密度值。
猴纖蛋白原(FG)酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒
結(jié)果分析
根據(jù)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,利用標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算待測(cè)樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,通過(guò)計(jì)算得到待測(cè)樣品的濃度。
注意事項(xiàng):
A 仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。
B 檢查試劑盒標(biāo)簽上的有效期。如果超過(guò)有效期,請(qǐng)勿使用。
C 按說(shuō)明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)。
D 標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者,注意低溫保存。
E 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品,(比如移液器,試管,清洗器,酶標(biāo)儀)。
F 按說(shuō)明書將所用試劑平衡至室溫,根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。
G 檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件,保證所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書推薦的條件存儲(chǔ)。
H 檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液(比如沉淀或變色)。有些試劑,比如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或者檢測(cè)稀釋液,可能在設(shè)計(jì)時(shí)就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標(biāo)板之前,必需充分混勻。而由于沉淀物的特性,在加入酶標(biāo)板之前,必需不停攪拌。
I 保證充分的孵育時(shí)間和溫度。
J 切勿使用不同生產(chǎn)批號(hào)的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。
K 在混合或溶解蛋白溶液時(shí),避免泡沫產(chǎn)生。
L 在實(shí)驗(yàn)開始之前,安排好實(shí)驗(yàn)流程。
M 在實(shí)驗(yàn)開始之前,清潔工作臺(tái)。
N 若有問(wèn)題,應(yīng)與我公司或代理商的技術(shù)支持聯(lián)系
免責(zé)聲明
試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或生物體實(shí)驗(yàn),否則所產(chǎn)生的一切后果,由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān), 本公司概不負(fù)責(zé)。
嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作,不同批號(hào)不可交換使用,實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書操作,后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。
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