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猴補(bǔ)體成分7(C7)酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒
實(shí)驗(yàn)原理
1. 抗體或抗原的吸附:將待測(cè)抗原或抗體吸附到固相載體上,常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團(tuán),能夠與待測(cè)抗原或抗體特異性結(jié)合。
2. 酶標(biāo)記的抗體或抗原的結(jié)合:將酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)抗原或抗體結(jié)合,形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力,能夠與待測(cè)抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。
3. 底物顯色反應(yīng):當(dāng)酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時(shí),酶能夠催化底物分解,產(chǎn)生顏色變化。通過(guò)測(cè)量顏色的變化程度,可以判斷待測(cè)抗原或抗體的濃度。
試劑盒性能
檢測(cè)范圍:5 pg/mL – 160 pg/mL。
靈敏度:檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。
特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。
重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。
猴補(bǔ)體成分7(C7)酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒
試劑盒組成
名稱 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 12 孔×8 條 | 12 孔×4 條 | 無(wú) |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.5mL | 0.5mL | 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋 |
標(biāo)準(zhǔn)品xi釋液 | 6mL | 3mL | 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋 |
樣本xi釋液 | 6mL | 3mL | 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋 |
檢測(cè)抗體 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
20×洗滌緩沖液 | 20mL | 20mL | 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋 |
底物 A | 6mL | 3mL | 無(wú) |
底物 B | 6mL | 3mL | 無(wú) |
終止液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
封板膜 | 2 張 | 2 張 | 無(wú) |
說(shuō)明書(shū) | 1 份 | 1 份 | 無(wú) |
自封袋 | 1 個(gè) | 1 個(gè) | 無(wú) |
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 準(zhǔn)備試劑盒:將試劑盒從冰箱中取出,室溫放置30分鐘以上,使試劑盒恢復(fù)至室溫。
2. 加樣:分別向各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和空白孔,每孔加入50μl。
3. 孵育:用封板膠紙封住反應(yīng)孔,輕輕振蕩混勻,37℃孵育1小時(shí)。
4. 洗滌:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液充分洗滌4-5次,每次30秒。
5. 加酶標(biāo)二抗:每孔加入50μl酶標(biāo)二抗溶液,輕輕振蕩混勻,37℃孵育30分鐘。
6. 洗滌:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液充分洗滌4-5次,每次30秒。
7. 加底物:每孔加入50μl底物溶液,輕輕振蕩混勻,37℃孵育15-20分鐘。
8. 終止反應(yīng):每孔加入50μl終止液,輕輕振蕩混勻。
9. 讀數(shù):用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處讀取各孔的光密度值。
注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存于2-8℃,切勿反復(fù)凍融或長(zhǎng)時(shí)間保存于室溫。
2. 實(shí)驗(yàn)前確保所有試劑均已恢復(fù)至室溫。
3. 加樣時(shí)注意避免產(chǎn)生氣泡。
4. 洗滌時(shí)要保證充分洗滌,避免殘留物影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5. 底物溶液應(yīng)避光保存,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中。
6. 酶標(biāo)儀應(yīng)使用450nm波長(zhǎng)進(jìn)行讀數(shù),其他波長(zhǎng)可能導(dǎo)致誤差。
7. 本試劑盒僅用于科研實(shí)驗(yàn)和診斷參考,不適用于臨床診斷和治療。
結(jié)果分析
根據(jù)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,利用標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算待測(cè)樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,通過(guò)計(jì)算得到待測(cè)樣品的濃度。
化學(xué)實(shí)驗(yàn)室守則
1. 實(shí)驗(yàn)室要保持安靜,嚴(yán)禁大聲喧嘩、吵鬧。
2. 在實(shí)驗(yàn)前,要預(yù)先作好實(shí)驗(yàn)前前準(zhǔn)備,進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí),要有秩序,按規(guī)定的座位就座。
3. 實(shí)驗(yàn)前,必須了解清楚實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、目的、要求和實(shí)驗(yàn)步驟。
4. 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí),應(yīng)先查點(diǎn)儀器、產(chǎn)品是否齊全,不得隨意調(diào)換,如發(fā)現(xiàn)問(wèn)題,及時(shí)報(bào)告。
5. 實(shí)驗(yàn)必須按步驟進(jìn)行,并仔細(xì)觀察,做好記錄,實(shí)驗(yàn)后后及時(shí)寫(xiě)好實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
6. 實(shí)驗(yàn)時(shí),要愛(ài)護(hù)儀器,節(jié)省產(chǎn)品,由于違反操作規(guī)程而損壞丟失的儀器,必須賠償。
7. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束,要將儀器整理或清洗,保持桌面,室內(nèi)的整潔后才能離開(kāi)。
8. 本守則在實(shí)驗(yàn)前都應(yīng)需知。
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