猴胎兒血紅蛋白(HBF)ELISA試劑盒   

試劑盒組成

操作步驟

1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；

3. 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加樣本xi釋液 40μL；

4. 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 50μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗 板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7. 所有孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。

操作注意事項(xiàng)

1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 濃度為 0 的標(biāo)準(zhǔn)品可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，終結(jié)果乘以5才是樣本終濃度。

4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

6. 若中英文說明書有誤，請(qǐng)以中文說明書為準(zhǔn)。

7. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

8. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

猴胎兒血紅蛋白(HBF)ELISA試劑盒   

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

試劑盒會(huì)出現(xiàn)的問題及解決辦法：

1. 加入反應(yīng)終止液后，沒有吸光值或吸光值偏低。

a.原因：未加入酶標(biāo)記物。

解決辦法：請(qǐng)按照操作步驟進(jìn)行。

b.原因：試劑盒內(nèi)容物未能充分回。

解決辦法：確定試劑盒內(nèi)容物回溫后再進(jìn)行操作。

c.原因：室溫太低。

解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請(qǐng)于操作步驟4，適當(dāng)延長(zhǎng)溫育時(shí)間。

d.原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。

解決辦法： 請(qǐng)用試劑盒內(nèi)所提供的清洗液清洗。

e.原因：試劑盒已過有效期限。

解決辦法：請(qǐng)更換成仍在有效期限內(nèi)的試劑盒。

2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳，或是平行性不好。

a.原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

解決辦法： 請(qǐng)確認(rèn)溫育位置既不透光也不透風(fēng)(如抽屜內(nèi))。

b.原因：操作時(shí)間拖太久。

解決辦法：請(qǐng)?jiān)诜椒ㄊ炀毢笤龠M(jìn)行操作。

c.原因：微孔間相互污染。

解決辦法： 加樣品時(shí)，請(qǐng)小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

d.原因：標(biāo)準(zhǔn)品或酶標(biāo)記物所加入的量不一致。

解決辦法：請(qǐng)使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。

e.原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確。

解決辦法：加樣品或試劑時(shí)，吸頭請(qǐng)勿接觸微孔。

f.原因：洗板過程發(fā)生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進(jìn)行下一步驟)。

解決辦法：請(qǐng)隨時(shí)監(jiān)控洗板機(jī)洗板過程，洗完后立即進(jìn)行下一步驟。

3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

a.原因：室溫太高(>25℃)。

解決辦法： 若無法降低室內(nèi)溫度，請(qǐng)適當(dāng)縮短步驟4的溫育時(shí)間。

b.原因：底物溶液受到污染。

解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍(lán)色，請(qǐng)不要再使用。

c.原因：反應(yīng)時(shí)間超過太久。

解決辦法：請(qǐng)控制反應(yīng)時(shí)間。

d.原因：酶標(biāo)記物污染了盒內(nèi)其它試劑。

解決辦法：使用過的吸頭應(yīng)立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標(biāo)記物與底物溶液)接觸過的容器應(yīng)立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)

4. 陰性標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值低于陽性標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值。

a.原因：微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法： 試劑加完后，需輕敲盤四周使其充分混合均勻。

b.原因：洗板過程發(fā)生問題(同2-f.)。

解決辦法：請(qǐng)參考2-f.

c.原因：添加樣品或酶標(biāo)記物的量不一致。

解決辦法： 請(qǐng)參考2-d.

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