猴N端中段骨鈣素(N-MID-OT)酶聯(lián)免疫試劑盒

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T（可拆）

產(chǎn)品數(shù)量：咨詢

產(chǎn)品應用：ELISA實驗

產(chǎn)品貨期：現(xiàn)貨

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種基于抗原抗體反應的免疫學檢測方法。其基本原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合，通過酶對底物反應的顯色反應，對樣本中的待測物質(zhì)進行定量或定性分析。ELISA方法具有靈敏度高、特異性強、操作簡便、適用范圍廣等特點，因此在生物醫(yī)學研究、臨床診斷和食品安全檢測等領域得到了廣泛應用。

試劑盒性能

 檢測范圍：5 pg/mL – 160 pg/mL。

 靈敏度：檢測濃度小于1.0 pg/mL。

 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

 重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

準備工作

1.孔板室溫平衡1小時

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準備各型號的移液槍、槍頭、量筒

5.準備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本xi釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設置好振板器、洗板器

9.準備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說明書提示，溶解標準品

11.配制不同濃度的標準品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預實驗結(jié)果稀釋樣本

14.準備好封板膜

猴N端中段骨鈣素(N-MID-OT)酶聯(lián)免疫試劑盒

實驗步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標板孔中的非特異性結(jié)合位點，以減少非特異性結(jié)合。

4. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入待測樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

6. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的樣本和其他雜質(zhì)。

7. 加酶標抗體：加入酶標記的抗體，使其與特異性結(jié)合的樣本中的待測物質(zhì)發(fā)生反應。

8. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的酶標抗體和其他雜質(zhì)。

9. 顯色反應：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

10. 終止反應：加入終止液，停止酶催化反應。

11. 檢測：用酶標儀測定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

實驗注意事項

1. 抗原和抗體的儲存：應嚴格按照說明書要求存放抗原和抗體，避免反復凍融和長時間暴露在高溫環(huán)境中。同時要保證試劑盒未過期，以獲得可靠的實驗結(jié)果。

2. 加樣技術：加樣時應保證加入的體積準確且不產(chǎn)生氣泡，避免加在孔壁的邊緣，以免影響與固相表面的接觸。加樣時應在每孔的旁邊放置一個加樣對照孔，以監(jiān)測加樣的準確性和重復性。

3. 溫育：溫育是ELISA實驗中的重要步驟，溫育時間和溫度的控制對于抗原抗體反應的進行和結(jié)果的影響至關重要。必須嚴格按照說明書要求進行溫育，并注意保持恒溫狀態(tài)。

4. 洗滌：洗滌是ELISA實驗中的一步，它可以去除未結(jié)合的物質(zhì)，提高檢測的特異性和靈敏度。洗滌時應保證每次洗滌時間充足，并更換洗滌液以保證洗滌效果。同時要避免在洗滌過程中產(chǎn)生氣泡，以免影響洗滌效果。

結(jié)果判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

實驗室安全

1. 實驗室應定期進行安全檢查，確保設備、設施完好有效。

2. 實驗室應按規(guī)定配備消防器材、急救箱等安全設施，并定期檢查其使用狀態(tài)。

3. 在實驗室內(nèi)不得擅自更改電器線路或使用未經(jīng)批準的電器設備。

4. 實驗室內(nèi)的消防通道、安全出口等應保持暢通無阻，嚴禁堆放雜物。

5. 在進行高溫、低溫、高壓、真空等危險性實驗時，必須采取相應的安全措施，確保人員和設備安全。

6. 實驗室內(nèi)嚴禁吸煙和吃東西，以免引起火災或中毒等安全事故。

7. 在實驗室內(nèi)應保持安靜，不得大聲喧嘩或擅自離崗，以免影響實驗的進行和實驗室的安全。

8. 實驗室內(nèi)的門窗、玻璃等易損部位應保持完好無損，如有損壞應及時報修。

9. 在進行易燃、易爆、有毒、有害或其他危險性實驗時，必須至少有兩人同時在場，以便相互照應和應對突發(fā)情況。

10. 實驗室內(nèi)的儀器、試劑等應按規(guī)定進行標識和管理，以確保使用正確和安全可靠。

11. 實驗室內(nèi)應保持適宜的溫度和濕度，避免影響實驗結(jié)果和設備的正常運行。

12. 在實驗室內(nèi)不得私自拆卸或修理設備儀器，如有需要應請專業(yè)人員協(xié)助處理。

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