猴成纖維細(xì)胞生長因子9(FGF9)ELISA試劑盒

ELISA試劑盒的實驗原理

ELISA試劑盒的實驗原理是建立在抗原與抗體免疫學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上的，同時結(jié)合了酶的催化作用。其基本原理包括三個方面：

1.抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性。

2.抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性。

3.酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。

ELISA法一方面是建立在抗原與抗體免疫學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上，因而具有特異性。而另一方面又由于酶標(biāo)記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結(jié)合物，它可以催化底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生放大作用，正因為此種放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一種既敏感又特異的方法。

猴成纖維細(xì)胞生長因子9(FGF9)ELISA試劑盒

ELISA試劑盒的操作步驟如下

1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標(biāo)板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過夜包被。

2.洗滌：棄包被液（用力拍干，再用無塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿），每次3min~5min。

3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。

4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

5.結(jié)合一抗：用1×PBST緩沖液1∶1000稀釋被檢血清，每孔100μl，要設(shè)立陰性對照，37℃孵育1.5h。

6.洗滌：同上。

7.結(jié)合酶標(biāo)二抗：每孔加1×PBST緩沖液1000倍稀釋的酶標(biāo)二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀釋倍數(shù)根據(jù)產(chǎn)品不同有所不同，可按說明書進行）50μl，37℃孵育1h。

8.洗滌：同上。

9.顯色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室溫避光顯色10min。

10.待顯色后，每孔加入50μl終止液（2mol/L H2SO4）終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀讀取450nm的OD值，以確定血清抗體水平。

以上步驟僅供參考，具體操作請根據(jù)實際情況和產(chǎn)品說明書進行。

注意事項

1. 保證試劑盒的質(zhì)量：選擇質(zhì)量可靠、經(jīng)過認(rèn)證的試劑盒，避免使用過期或質(zhì)量不穩(wěn)定的試劑。

2. 標(biāo)準(zhǔn)化操作：按照試劑盒說明書進行標(biāo)準(zhǔn)化操作，避免操作過程中的人為誤差。

3. 避免交叉污染：在實驗過程中，要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染，以免影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4. 溫度控制：ELISA檢測需要在恒溫條件下進行，因此要確保實驗過程中溫度的穩(wěn)定和準(zhǔn)確性。

5. 空白吸光度值：在實驗過程中，要特別注意空白吸光度值的穩(wěn)定性，避免其對檢測結(jié)果的影響。

6. 實驗數(shù)據(jù)的處理：對實驗數(shù)據(jù)進行正確的處理和分析，包括對異常值的處理、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換等，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

7. 質(zhì)量控制：在實驗過程中，應(yīng)進行必要的質(zhì)量控制，如定期進行室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評等，以確保實驗室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

ELISA試劑盒組成

ELISA測定結(jié)果計算方法

1.計算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX )和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX)。

2.兩個平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個特定的數(shù)值，例如0.400，試驗才有效。

3.3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個陰性對照重新計算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上范圍，則該次實驗無效。

4.陽性判定值按下式計算：陽性判定值=NCX+0.05。

5.標(biāo)本A值>陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。

需要注意的是，試劑盒的常數(shù)只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。

產(chǎn)品包裝：盒裝

性狀：瓶裝液體

規(guī)格：96T/48T

保存條件：2-8℃

保存期限：6個月

運輸條件：2-8℃低溫運輸，用干冰或者生物冰袋低溫運輸。

ELISA的發(fā)展史

1、 目前，分子生物學(xué)正在并肯定會讓我們對整個生命科學(xué)有一個全面而*的認(rèn)識，其對免疫測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的。

2、ELISA測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展，而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用。

3、ELISA試劑盒它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。

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