猴正輔因子4(PC4)酶聯(lián)免疫試劑盒

實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種基于抗原抗體反應的免疫學檢測方法。其基本原理是利用抗原抗體的特異性結合，通過酶對底物反應的顯色反應，對樣本中的待測物質進行定量或定性分析。ELISA方法具有靈敏度高、特異性強、操作簡便、適用范圍廣等特點，因此在生物醫(yī)學研究、臨床診斷和食品安全檢測等領域得到了廣泛應用。

ELISA試劑盒用法

1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過夜包被。

2.洗滌：棄包被液（用力拍干，再用無塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿），每次3min~5min。

3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。

4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

5.加樣：加入已經稀釋好的樣品，37℃反應1h。一般血清樣本加入50-100μl，充分混勻。

6.洗滌：用洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

7.加入酶標試劑：每孔加入100μl酶標溶液，37℃，1h。

8.洗滌：用洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A液50μl，再加入顯色劑B液50μl，37℃避光10-15min。

10.終止及測定：加入50μl終止液，終止反應，用酶標儀在450nm波長處測OD值。

猴正輔因子4(PC4)酶聯(lián)免疫試劑盒 

實驗步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的抗原和其他雜質。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標板孔中的非特異性結合位點，以減少非特異性結合。

4. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的阻斷液和其他雜質。

5. 加樣：加入待測樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結合。

6. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的樣本和其他雜質。

7. 加酶標抗體：加入酶標記的抗體，使其與特異性結合的樣本中的待測物質發(fā)生反應。

8. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的酶標抗體和其他雜質。

9. 顯色反應：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應，產生有色產物。

10. 終止反應：加入終止液，停止酶催化反應。

11. 檢測：用酶標儀測定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

實驗注意事項

1. 保證試劑盒的質量：選擇正規(guī)廠家生產的試劑盒，確保試劑盒的質量和穩(wěn)定性。

2. 嚴格控制實驗條件：實驗過程中要嚴格控制溫度、pH值、離子強度等條件，以保證實驗結果的準確性。

3. 避免交叉污染：實驗過程中要避免交叉污染，確保每個步驟使用的試劑和材料都是清潔無污染的。

4. 標準化操作：實驗操作要標準化，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，避免人為誤差對實驗結果的影響。

5. 定期校準：定期對實驗儀器進行校準，確保儀器的準確性和穩(wěn)定性。

6. 保存好實驗數(shù)據(jù)：實驗過程中要保存好實驗數(shù)據(jù)，以便后續(xù)分析和處理。

ELISA試劑盒實驗數(shù)據(jù)的計算處理方法

1、擬和曲線：

輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400

輸入第二行：該濃度下的調整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進入圖表向導，在“標準類型"中選擇“xy散點圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點圖"，按“下一步";選擇“系列產生在行"，按“下一步";數(shù)據(jù)標志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸，濃度;按下一步，點擊完成?？傻们€圖。

單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢線"，在類型中，選擇多項式;在選項中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面說的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

植物樣本處理：

植物組織的提取，不管是根莖組織還是葉片組織還是果實組織，都應該采用鮮重的計重方式，一般要遵循以下原則：

    1.稱取的組織重量不能低于50mg。

    2.勻漿的比例按照10%，即1g組織加9ml的勻漿液，勻漿液一般選取PBS(PH=7.2-7.4)

    3.組織在勻漿器勻漿過程中，勻漿液應該分2次加進去，這樣勻漿更充分。

    4.充分勻漿完成后離心取上清，離心機的轉數(shù)選取2000-3000轉每分，轉數(shù)不宜超過5000.離心時間為15-30分鐘。

新手實驗注意事項：

新手以及那些沒有固定協(xié)作供貨商的顧客購買時往往有兩種疑慮，首要便是價格，其次，便是質量，國內試劑盒相關于進口試劑盒來說價格自然會低許多。關于新手的視點來說價格低并不必定就會考慮購買，同時還在猶疑質量問題，由于沒有用過新品牌的試劑盒心中總是在懷疑。利用交叉實驗即可辨別是否造假：小鼠ELISA檢測試劑盒說明書

1、取出購買的試劑盒A的包被板兩條。

2、一條包被板加試劑盒A的標準品做標準曲線。

3、另一條包被板加試劑盒B的標準品做標準曲線。

4、后續(xù)操作按照試劑盒說明書進行，加檢測抗體、酶復合物和底物。

我司在科研領域積累了豐富的經驗，正是為了幫助中國的相關單位能夠利用我司的經驗與技術優(yōu)勢，為中國民眾提供更安全，快捷的生命領域。

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