本試劑盒只供體外研究使用，不用于臨床診斷 

龜免疫球蛋白 M（IgM） 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 

本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中龜免疫球蛋白 M（IgM）的含量。 

有效期：6 個(gè)月 

保存條件：2-8℃ 

試劑盒組成： 

備注： 

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1. （96T/48T）打開(kāi)包裝后請(qǐng)及時(shí)檢查所有物品是否齊全。 

2. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：200、100、50、25、12.5、0 μg/mL 

3. 經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取 50μL 樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)，可用樣本希釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 

檢測(cè)前準(zhǔn)備工作： 

1. 請(qǐng)?zhí)崆?20 分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。 

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶溶解后再配置洗滌液?？蓪?20ml 濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml 工作濃度的洗滌液，未用完的放回 4℃ 

3. 20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按 1：20 稀釋?zhuān)?1 份 20×洗滌緩沖液加 19 份蒸餾水。

龜免疫球蛋白M（IgM）酶聯(lián)免疫試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理： 

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被龜免疫球蛋白 M（IgM）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP 標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物 TMB 顯色，TMB 在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的龜免疫球蛋白 M（IgM）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材： 

1. 酶標(biāo)儀（450nm） 

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 

3. 37℃恒溫箱 

4. 蒸餾水或去離子水 

樣本處理及要求： 

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過(guò)夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

2. 血漿：用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8℃ 1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

3. 組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱(chēng)重后將組只剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的 PBS（一般按1:9 的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對(duì)應(yīng) 9mL 的 PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于 5000×g 離心 5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清：請(qǐng) 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

5. 其它生物標(biāo)本：1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測(cè)。 

6. 樣品外觀：樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。 

7. 樣品保存：樣品收集后若在 1 周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1 個(gè)月內(nèi)檢測(cè)），或-80℃（6 個(gè)月內(nèi)檢測(cè)），避免反復(fù)凍融，標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。 

龜免疫球蛋白M（IgM）酶聯(lián)免疫試劑盒

注意事項(xiàng)： 

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。 

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。 

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。 

4. 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不 能使用。 

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。 

6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。 

7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。 

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。 

9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。 

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。 

操作步驟：

1．從室溫平衡 60min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。 

2．設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL。 

3．樣本孔中加入待測(cè)樣本 50μL；空白孔不加。樣本不足，或者樣本濃度過(guò)高，可用樣本希釋液做稀釋。

4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。 

5．棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5次（也可用洗板機(jī)洗板）。 

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 

7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算： 

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的 OD 值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的 OD 值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。 

 試劑盒性能： 

1. 檢測(cè)范圍：1.32 μg/mL –200 μg/mL。 

2. 靈敏度：檢測(cè)濃度小于 0.78 μg/mL。 

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。 

4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于 10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

 技術(shù)小提示： 

1. 當(dāng)混合或重溶蛋白溶液時(shí)，盡量避免起沫。 

2. 為了避免交叉感染，配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請(qǐng)分別使用不同的移液槽。 

3. 每次孵育時(shí)，請(qǐng)正確使用封板膠可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。 

4. 混合后的顯色底物在上板前應(yīng)為無(wú)色，請(qǐng)避光保存；假如微孔板后，將由物色變成不同深度的藍(lán)色。 

5. 終止液上板順序應(yīng)同顯色底物上板順序一致；加入終止液后，孔內(nèi)顏色由藍(lán)變黃；若孔內(nèi)有綠色，則表明孔內(nèi)液體未混勻；請(qǐng)充分混合。 

說(shuō)明： 

1. 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。 

2. 最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)，請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。 

3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別，如：檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等，請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，網(wǎng)站電子版說(shuō)明書(shū)僅作參考。 

4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明才會(huì)得到最佳的檢測(cè)結(jié)果。