植物(Plant)脂氧合酶(LOX)ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)方法。其基本原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合，通過酶對(duì)底物反應(yīng)的顯色反應(yīng)，對(duì)樣本中的待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定量或定性分析。ELISA方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、適用范圍廣等特點(diǎn)，因此在生物醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷和食品安全檢測(cè)等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。

植物(Plant)脂氧合酶(LOX)ELISA試劑盒

準(zhǔn)備工作

1.孔板室溫平衡1小時(shí)

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準(zhǔn)備各型號(hào)的移液槍、槍頭、量筒

5.準(zhǔn)備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本希釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器

9.準(zhǔn)備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說明書提示，溶解標(biāo)準(zhǔn)品

11.配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果稀釋樣本

14.準(zhǔn)備好封板膜

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟：

1. 加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl。注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。每次實(shí)驗(yàn)都應(yīng)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果樣品濃度過高，可以用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物su標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物su標(biāo)記抗體加99μl生物su標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

3. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物su標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

5. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的計(jì)算處理方法

1、擬和曲線：

輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400

輸入第二行：該濃度下的調(diào)整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進(jìn)入圖表向?qū)В凇皹?biāo)準(zhǔn)類型"中選擇“xy散點(diǎn)圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點(diǎn)圖"，按“下一步";選擇“系列產(chǎn)生在行"，按“下一步";數(shù)據(jù)標(biāo)志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸，濃度;按下一步，點(diǎn)擊完成?？傻们€圖。

單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢(shì)線"，在類型中，選擇多項(xiàng)式;在選項(xiàng)中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面說的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

2、計(jì)算濃度：

第一次實(shí)驗(yàn)：

標(biāo)準(zhǔn)曲線為：

y = -4E-05x2 + 0.026x

R2 = 0.9745

為例，已知OD值，計(jì)算濃度。

由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：

4E-05x2 -0.026x +y=0

ax2 +bx +y=0

注意事項(xiàng)

在進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí)，需要注意以下幾點(diǎn)：

1. 保證試劑盒的質(zhì)量：選擇質(zhì)量可靠、經(jīng)過認(rèn)證的試劑盒，避免使用過期或質(zhì)量不穩(wěn)定的試劑。

2. 標(biāo)準(zhǔn)化操作：按照試劑盒說明書進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化操作，避免操作過程中的人為誤差。

3. 避免交叉污染：在實(shí)驗(yàn)過程中，要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染，以免影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4. 溫度控制：ELISA檢測(cè)需要在恒溫條件下進(jìn)行，因此要確保實(shí)驗(yàn)過程中溫度的穩(wěn)定和準(zhǔn)確性。

5. 空白吸光度值：在實(shí)驗(yàn)過程中，要特別注意空白吸光度值的穩(wěn)定性，避免其對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

6. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理：對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行正確的處理和分析，包括對(duì)異常值的處理、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換等，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

7. 質(zhì)量控制：在實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)進(jìn)行必要的質(zhì)量控制，如定期進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)等，以確保實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

公司簡(jiǎn)介

上海篤瑪生物科技有限公司是一家從事生物學(xué)試劑及試劑盒的高科技生物企業(yè)?？偛课挥谏虾＃⒃谌珖?guó)設(shè)有經(jīng)銷或代理機(jī)構(gòu)。產(chǎn)品因可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和較為完善的售后服務(wù)確立了“篤瑪生物"良好的品牌形象。公司秉承“以客戶為中心、以產(chǎn)品為保障、以誠(chéng)信為基礎(chǔ)、以創(chuàng)新為宗旨"的發(fā)展理念，擁有專業(yè)的研發(fā)和質(zhì)量檢測(cè)團(tuán)隊(duì)以及*的倉(cāng)儲(chǔ)和物流系統(tǒng)?！昂V瑪生物"已經(jīng)得到全國(guó)科研工作者的認(rèn)可。

Shanghai Duma Biotechnology Co., Ltd. is a high-tech biotechnology enterprise engaged in biological reagents and test kits. Headquartered in Shanghai, with distribution or agency agencies nationwide. The product has established a good brand image of "Duma Biotechnology" due to its reliable and stable quality and relatively complete after-sales service. The company adheres to the development philosophy of "customer centeredness, product assurance, integrity as the foundation, and innovation as the purpose", and has a professional R&D and quality inspection team as well as advanced warehousing and logistics systems. "Duma Biotechnology" has been recognized by scientific researchers nationwide and has become a well-known brand highly praised by distributors.

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