豬封閉蛋白3(CLDN3) ELISA 試劑盒 

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

豬封閉蛋白3(CLDN3) ELISA 試劑盒   

樣本處理

在處理樣本時(shí)，需要保證無(wú)菌操作，避免污染。同時(shí)，需要按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求，將樣本進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯吞幚怼Ｈ绻麡颖局写嬖陔s質(zhì)或顆粒物，需要*行離心或過(guò)濾處理。

ELISA試劑盒如何操作

ELISA試劑盒的操作步驟如下：

1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標(biāo)板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過(guò)夜包被。

2.洗滌：棄包被液（用力拍干，再用無(wú)塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿），每次3min~5min。

3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。

4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

5.結(jié)合一抗：用1×PBST緩沖液1∶1000稀釋被檢血清，每孔100μl，要設(shè)立陰性對(duì)照，37℃孵育1.5h。

6.洗滌：同上。

7.結(jié)合酶標(biāo)二抗：每孔加1×PBST緩沖液1000倍稀釋的酶標(biāo)二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀釋倍數(shù)根據(jù)產(chǎn)品不同有所不同，可按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行）50μl，37℃孵育1h。

8.洗滌：同上。

9.顯色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室溫避光顯色10min。

10.待顯色后，每孔加入50μl終止液（2mol/L H2SO4）終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀讀取450nm的OD值，以確定血清抗體水平。

以上步驟僅供參考，具體操作請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況和產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

ELISA測(cè)定結(jié)果如何計(jì)算

ELISA測(cè)定結(jié)果計(jì)算方法如下：

1.計(jì)算陰性對(duì)照A值的平均數(shù)(NCX )和陽(yáng)性對(duì)照A值的平均數(shù)(PCX)。

2.兩個(gè)平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值，例如0.400，試驗(yàn)才有效。

3.3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個(gè)陰性對(duì)照重新計(jì)算NCX；如有兩個(gè)陰性對(duì)照A值超出以上范圍，則該次實(shí)驗(yàn)無(wú)效。

4.陽(yáng)性判定值按下式計(jì)算：陽(yáng)性判定值=NCX+0.05。

5.標(biāo)本A值>陽(yáng)性判定值的為陽(yáng)性，小于陽(yáng)性判定值的為陰性。

需要注意的是，試劑盒的常數(shù)只適合于該特定條件下，而不是對(duì)各種試劑均可通用。

注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本試劑盒的使用說(shuō)明，確保所有材料、器具和試劑準(zhǔn)備齊全。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，請(qǐng)務(wù)必遵循實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，并注意控制實(shí)驗(yàn)條件的一致性。

3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)勿觸摸酶標(biāo)板上的酶標(biāo)抗體區(qū)域，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后請(qǐng)及時(shí)清洗并整理實(shí)驗(yàn)器具，避免交叉污染。

5. 本試劑盒僅供體外診斷使用，使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，如有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系廠家或?qū)I(yè)技術(shù)人員。

公司簡(jiǎn)介

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