人單核細胞趨化蛋白3(MCP-3)酶聯(lián)免疫試劑盒

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

計算

以標準物的濃度為橫坐標（對數(shù)坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

人單核細胞趨化蛋白3(MCP-3)酶聯(lián)免疫試劑盒

注意事項

1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。

2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

3. 一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。

5. 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請最后乘以稀釋倍數(shù)。

6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。

7. 底物請避光保存。

8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

操作步驟

實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?/span>100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加標記抗體工作液 100μl（取1μl標記抗體加99μl標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。

3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

人單核細胞趨化蛋白3(MCP-3)酶聯(lián)免疫試劑盒

使用ELISA試劑盒操作過程中需注意事項

1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。

2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。

3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。

4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。

5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。