綿羊血漿膜蛋白(GMP-140) ELISA 試劑盒 

試驗原理：
本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將待測物質(zhì)和標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。


ELISA試劑盒實驗數(shù)據(jù)的計算處理方法
1、擬和曲線：
輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400
輸入第二行：該濃度下的調(diào)整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42
選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進(jìn)入圖表向?qū)?，在“?biāo)準(zhǔn)類型"中選擇“xy散點圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點圖"，按“下一步";選擇“系列產(chǎn)生在行"，按“下一步";數(shù)據(jù)標(biāo)志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸，濃度;按下一步，點擊完成。可得曲線圖。
單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢線"，在類型中，選擇多項式;在選項中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。
得到公式和R平方值。
也可以用上面說的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

2、計算濃度：
第一次實驗：
標(biāo)準(zhǔn)曲線為：
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
為例，已知OD值，計算濃度。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：
4E-05x2 -0.026x +y=0
ax2 +bx +y=0


化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒
規(guī)格：96T/48T
檢測方法：雙抗體夾心法
檢測范圍:31.25~2000pg/mL

性能:
1．準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2．靈敏度：檢測濃度小于10 pg/ml。
3．特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4．重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

ELISA試劑盒優(yōu)點：
1、高效、靈敏、特異的抗體；
2、重復(fù)性和可靠性高；
3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；
5、可檢測指標(biāo)齊全：細(xì)胞因子檢測、心肌梗塞檢測、內(nèi)分泌檢測、肝纖維化檢測、自身免疫檢測、腫瘤標(biāo)志物檢測、傳染病檢測、特種蛋白檢測、優(yōu)生優(yōu)育檢測等等；
6、質(zhì)量保證，限度的節(jié)省實驗經(jīng)費。

影響試劑盒質(zhì)量的因素
    ELISA試劑盒變質(zhì)是ELISA實驗中比較常見的問題，下面小結(jié)影響ELISA試劑盒質(zhì)量事項。
1、試劑因素
不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量一致，即使是通過批批檢的項目其檢測結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。 嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。
2、樣本因素
標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風(fēng)濕因子、補體、異嗜性抗體、自身抗體、等，后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。
3、操作因素
ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。
4、方法學(xué)的影響
ELISA測定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法，其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的bu公平競爭等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。
5、灰區(qū)的設(shè)置
通常情況下，ELISA定性實驗以“陽性"和“陰性"來報告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值"(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。
6、標(biāo)本復(fù)查
ELISA手工檢測過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標(biāo)本及少見模式的檢測結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
7、常表示結(jié)果的常用方法
1).定性測定。
2).半定量測定 結(jié)果一般以滴度表示。
3).定量測定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

綿羊血漿膜蛋白(GMP-140) ELISA 試劑盒 

[說明]
1.由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。
2.最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān)，請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。
4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。
5.本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。
6.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。
7.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。
8.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。



*特別提醒*
1.取樣和存樣所用的凍存管、離心管、吸頭等需高溫滅菌處理；
2.所有存樣管口需以封口膜封好；
3.所有樣品管壁需要用防水記號筆清晰標(biāo)明編號（便于區(qū)分即可）；
4.所有樣品避免反復(fù)凍融5.如有特別要求，請與服務(wù)該區(qū)域的銷售經(jīng)理講明。

操作步驟：
1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
8. 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。

使用范圍：此產(chǎn)品供科研實驗使用，不得用于臨床。



注：
1.以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過1個月，-80℃不應(yīng)超過2個月。

2.如果樣本種類在實驗手冊中沒有提到，一般需要做預(yù)實驗以確定試劑盒能被用來檢測您的樣品。

3.用于組織或細(xì)胞裂解的化學(xué)裂解液中的某些化學(xué)物質(zhì)可能會影響ELISA實驗結(jié)果。

4.由于其他來源的抗原可能和本公司試劑盒中使用的抗體不匹配（例如，抗體的目標(biāo)，是構(gòu)象表位而不是線性表位），其他一些制造商的非重組或重組蛋白可能無法被本公司試劑盒所識別。

5.由于包括細(xì)胞活力，細(xì)胞數(shù)量，以及采樣時間等因素，從細(xì)胞培養(yǎng)上清液提取的樣品，可能無法被檢測。

6.建議采用新鮮樣品來檢測，不要存放時間過長。否則，蛋白質(zhì)降解和變性可能發(fā)生，*終導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

7.標(biāo)本溶血會影響*后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。


特別說明:
#.一周內(nèi)使用可存于4℃，需長時間存放或多次使用建議存于-20℃.

化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒
1.在各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各100μL，37°C孵育90分鐘
2.倒去孔內(nèi)液體，拍干，加入100μL化抗體工作液，37°C孵育 60分鐘
3.洗滌3次
4.加入 100μL酶結(jié)合物工作液，37°C孵育 30分鐘
5.洗滌5次
6.加入100μL 發(fā)光底物混合液，37°C孵育5分鐘左右
7.立即測定各孔的化學(xué)發(fā)光值
8.結(jié)果計算

實驗注意事項
1. 抗原和抗體的儲存：應(yīng)嚴(yán)格按照說明書要求存放抗原和抗體，避免反復(fù)凍融和長時間暴露在高溫環(huán)境中。同時要保證試劑盒未過期，以獲得可靠的實驗結(jié)果。
2. 加樣技術(shù)：加樣時應(yīng)保證加入的體積準(zhǔn)確且不產(chǎn)生氣泡，避免加在孔壁的邊緣，以免影響與固相表面的接觸。加樣時應(yīng)在每孔的旁邊放置一個加樣對照孔，以監(jiān)測加樣的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
3. 溫育：溫育是ELISA實驗中的重要步驟，溫育時間和溫度的控制對于抗原抗體反應(yīng)的進(jìn)行和結(jié)果的影響至關(guān)重要。必須嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行溫育，并注意保持恒溫狀態(tài)。
4. 洗滌：洗滌是ELISA實驗中的一步，它可以去除未結(jié)合的物質(zhì)，提高檢測的特異性和靈敏度。洗滌時應(yīng)保證每次洗滌時間充足，并更換洗滌液以保證洗滌效果。同時要避免在洗滌過程中產(chǎn)生氣泡，以免影響洗滌效果。

海篤瑪生物科技有限公司專業(yè)研發(fā) ELISA試劑盒長期為全國科研機構(gòu)、高校和科研人員提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，在保證產(chǎn)品質(zhì)量的同時，我們還配有扎實的售后技術(shù)咨詢和服務(wù)

服務(wù)承諾：
一、產(chǎn)品品質(zhì)保障（打造高品質(zhì)產(chǎn)品，若產(chǎn)品質(zhì)量存在任何問題，公司一律包退包換，質(zhì)量有保障，解除了客戶的后顧之憂）
二、提供免費代測服務(wù)（我司擁有專業(yè)酶免技術(shù)的工作人員為客戶提供來樣檢測服務(wù),限度實驗結(jié)果的有效性）
三、提供全程技術(shù)指導(dǎo)（專業(yè)的科順技術(shù)人員進(jìn)行指導(dǎo)）
四、全天在線服務(wù)（如果您在使用ELISA試劑盒產(chǎn)品時有任何的疑問，或者對我們有任何意見建議，您都可以通過來電或咨詢。）


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