CK(CK)測(cè)試盒  提供技術(shù)指導(dǎo)
用于體外定量測(cè)定人血清或血漿中CK含量的試劑盒，它是采用分光光度法原理，利用全自動(dòng)、或分光光度計(jì)，在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行CK定量檢驗(yàn)所使用的臨床化學(xué)體外診斷試劑。

分類(lèi)
按檢測(cè)原理分為以下兩類(lèi)
1. CK（酶偶聯(lián)法）。包括連續(xù)監(jiān)測(cè)法、IFCC推薦法、速率法、N-乙酰半法、磷酸肌酸底物法。
2. VK（比色法）

原理
CK（CreatineKinase,CK）通常存在于動(dòng)物的心臟、肌肉以及腦等組織的細(xì)胞漿和線粒體中，是一個(gè)與細(xì)胞內(nèi)能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP再生有直接關(guān)系的重要激酶，它可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷?；磻?yīng)。CK測(cè)定的方法主要有肌酸顯色法、酶偶聯(lián)法，還有熒光法和生物發(fā)光法。CK檢測(cè)試劑盒常用的方法是肌酸顯色法和酶偶聯(lián)法。

反應(yīng)原理
（1）肌酸顯色法（比色法）
磷酸肌酸+ADP 

 肌酸　+　ATP
肌酸++α-萘酚 

 紅色化合物(λ=540nm)
在一定范圍內(nèi)，紅色深淺與肌酸量成正比，從而可求得血清中CK活性。在反應(yīng)體系中加入Mg作激活劑；半供給巰基，保持CK活性中心必需基團(tuán)不被氧化；和硫酸鋅沉淀蛋白并中止反應(yīng)。
（2）酶偶聯(lián)法
磷酸肌酸+ADP 

 肌酸+ATP
ATP+葡萄糖 

 ADP+6-磷酸葡萄糖
6-磷酸葡萄糖+NADP 

 6-磷酸葡萄糖+NADPH
利用酶偶聯(lián)反應(yīng)原理連續(xù)監(jiān)測(cè)NADP還原生成NADPH，后者引起340nm吸光度的增高。在340nm監(jiān)測(cè)單位時(shí)間內(nèi)NADPH的生成量(ΔA/min)，可計(jì)算出CK的活性濃度。 

CK(CK)測(cè)試盒  提供技術(shù)指導(dǎo)
2. 計(jì)算方法

（1）酶偶聯(lián)法

式中6220為NADPH在340nm的摩爾吸光度，2.30為反應(yīng)液的總體積(ml)，0.10為血清用量(ml)。ΔA/min為平均每分鐘的吸光度變化值。
（2）肌酸顯色法（比色法）

樣本要去
1. 空腹采血，采血前不宜做劇烈運(yùn)動(dòng)。
2. 可用干燥管、肝素抗凝管采血加塞送檢。
3. 避免采用溶血、乳穈狀樣品。血液分離血清后2～8℃可穩(wěn)定一周。
檢測(cè)意義

1．正常參考值

(1) 肌酸顯色法：8～60U/L(0.5～3.6U)。
(2) 酶偶聯(lián)法：男24～195U/L，女24～170U/L。

2.CK酶臨床意義

增高：
(1) 主要用心肌梗死診斷，CK升高幅度較AST和LDH都大，且出現(xiàn)早，2-4小時(shí)開(kāi)始升高，12-48小時(shí)達(dá)到高峰，2-4天恢復(fù)到正常。尤其對(duì)心肌缺血和心內(nèi)膜下心肌梗死的診斷比其他酶靈敏度高。故動(dòng)態(tài)檢測(cè)CK變化有助于觀察病情和預(yù)后估計(jì)。
(2) 還見(jiàn)于進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良發(fā)作期、病毒性心肌炎、多發(fā)性心肌炎、肌肉損傷或手術(shù)后、腦血管疾病、酒精中毒、甲狀腺功能減退、肺梗塞等。
減低：見(jiàn)于甲狀腺功能亢進(jìn)癥

注意事項(xiàng)

1. 肌酸顯色法

(1) 肌酐、胍乙酸等也可與α-萘酚及產(chǎn)生顏色反應(yīng)。故腎功能衰竭患者應(yīng)用自身血清做空白對(duì)照，以消除肌酐的影響。
(2) α-萘酚為白色或略帶黃色之結(jié)晶，顏色過(guò)深，應(yīng)在乙醇中重結(jié)晶后再用。
(3) Mg為激活劑，半提供巰基，和硫酸鋅沉淀蛋白并中和反應(yīng)。
(4) 血清CK活性>200U/L時(shí)，應(yīng)用已知CK活性正常的血清稀釋后重測(cè)，其結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

2. 酶偶聯(lián)法

(1) 最好使用血清作標(biāo)本，也可用肝素抗凝血漿，因CK活性不穩(wěn)定，室溫僅能穩(wěn)定4h，4℃僅穩(wěn)定8～12h，故標(biāo)本采集后應(yīng)盡快分離血清，及時(shí)測(cè)定。不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)避光、低溫保存。溫度升高引起的酶失活為不可逆的。
(2) 紅細(xì)胞內(nèi)不含CK，輕度溶血無(wú)影響，但中、重度溶血可因紅細(xì)胞內(nèi)釋放出的AK、ATP及G6P，使CK值假性升高。
(3) Mg、Ca、Mn對(duì)該酶有激活作用，Cl、So、Po、枸櫞酸、氟化物可抑制其活性。