豚鼠胃動蛋白2(GKN2) ELISA 試劑盒

· 產品規(guī)格：96T/48T

· 實驗方法：夾心法

· 檢測范圍：78-5000pg/mL

· 檢測限：34.2pg/mL

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· 離開了細胞培養(yǎng)皿，還能愉快做實驗嗎

· 培育皿一般用玻璃或塑料制成，是培育微生物或細胞培育的常用試驗耗材，一般玻璃的能夠用于植物資料、微生物培育和動物細胞的貼壁培育也可能用到。塑料的可能是聚乙烯資料的，合適試驗室接種、劃線、分離細菌的操作，能夠用于植物資料的培育。培育皿易碎，在清洗和運用時要當心輕拿輕放，運用完后要及時清洗潔凈，存放在安全、固定的方位。

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· 培育皿的清潔：

· 1、浸泡：新的或用過的玻璃器皿要先用清水浸泡，軟化和溶解附著物。新玻璃器皿運用前得先用自來水簡略沖刷，然后用5%鹽酸浸泡過夜；用過的玻璃器皿往往附有許多蛋白質和油脂，干枯后不易沖刷掉，故用后應立即浸入清水中備沖刷。

· 2、沖刷：將浸泡后的玻璃器皿放到洗刷劑水中，用軟毛刷重復沖刷。不要留死角，并避免損壞器皿外表的光潔度。將沖刷潔凈的玻璃器皿洗凈、晾干，備浸酸。

· 3、.浸酸：浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中，又稱酸液，通過酸液的強氧化作用鏟除器皿外表的可能殘留物質。浸酸不該少于六小時，一般過夜或更長。放取器皿要當心。

· 4、沖刷：沖刷和浸酸后的器皿都必須用水充沛沖刷，浸酸后器皿是否沖刷的潔凈，直接影響到細胞培育的勝敗。手藝洗刷浸酸后的器皿，每件器皿至少要重復“灌水－倒空"15次以上，最后用重蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干后包裝備用。

· 培育皿運用留意事宜：

· 1、運用前通過清潔消毒，培育皿清潔與否對作業(yè)影響較大，可影響培育基的酸堿度，若有某些化學藥品的存在，會按捺細菌成長。

· 2、新購的培育皿應先用熱水沖刷，再置于質量分數為1%或2%的鹽酸溶液中浸泡數小時，使游離堿性物質除掉，再用蒸餾水沖刷2次。

· 3、若要培育細菌，再用高壓蒸氣(一般6.8*10的5次方Pa高壓蒸氣)，120℃的溫度下30min滅菌，置室溫中枯燥，或用干熱滅菌，就是將培育皿置于烘箱內，溫度控制在120℃左右的情況下保持2h，即可殺死細菌的胞牙。

· 4、通過消毒的培育皿才干接種培育運用。

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· ELISA試劑盒里都包含了哪些？

· 一、濃縮

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· 由于凈化進程中引入的溶劑，可能會下降待測組分的濃度或許不適宜直接分析，需求去除悉數有機溶劑。即試劑盒前處理進程中把樣本在60℃氮氣下吹干，再用復溶液溶解單調殘留物。

· 濃縮辦法：氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜。

· 二、均質

· ①組織樣本：肉、肝食品類切細，用絞肉機反復絞碎，混合均勻。

· ②水產樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細，用均質器均漿；材料表面較臟時,需適當用蒸餾水清洗。

· ③蛋類：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。

· ④生果、蔬菜類：先用水洗去泥沙，ELISA試劑盒然后除去表面的水分，取食用部分。

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細胞株與細胞系有何區(qū)別呢？又有何聯(lián)系呢？

今日我們就詳細講解下細胞株與細胞系。

傳代培育的細胞是細胞系；細胞株就是從細胞系挑選出來的 有特別特點的 比如無線增值的。

細胞株(Cell Strain)

        經過選擇法或克隆形成法從原代培育物或細胞系中取得具有特別性質或標志物的培育物稱為細胞株(Cell Strain)，也就是說，細胞株是用單細胞別離培育或經過挑選的辦法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特別性質或標志必須在整個培育期間一直存在。

細胞系（cell line）

        原代培育物經傳代成功后即為細胞系(cell line)， 由原先存在于原代培育物中的細胞世系所組成。如果不能持續(xù)傳代，或傳代次數有限， 可稱為有限細胞系(finite cell line)， 如能夠接連培育， 則稱為接連細胞系(continuous cell line)， 培育50代以上并無限培育下去。

3.競爭法ELISA

小分子抗原與半抗原的檢測方法常用競爭法ELISA，待檢樣本中抗原越多，被結合的酶標抗原的量會減少，彼此形成競爭負相關體系，顯色物質也就越少，根據顯色物質的比例可擬合得到待測抗原含量。

4.其他方法

a.免疫抑制法測ELISA：固相包被抗原，被檢樣本對底物顯色的抑制程度與樣本中所含抗原的量成正比，二者之差為待測抗原含量，原理類似與競爭法ELISA。

b.阻斷ELISA：目的檢測特異性抗體，也稱為競爭ELISA，原理為固相包被抗原，待測樣本與一抗酶標競爭孵育，待檢樣本中抗體越多，顯色越淺，反則反之。非洲豬瘟病毒抗體檢測試劑盒中涉及該法。

c.此外有用于檢測IgM抗體的抗體捕捉ELISA，有固相載體改變的Dot-ELISA（硝酸纖維素膜）和C-ELISA（滌綸布），還有技術分類的TRFIA和多因子檢測等。

ELISA的評估

ELISA Kit的多指標決定了產品質量的優(yōu)劣，優(yōu)秀的試劑盒需要對如下6大項指標進行測定評估，分析如下：

  1、準確性

ELISA Kit的多指標決定了產品質量的優(yōu)劣，優(yōu)秀的試劑盒需要對如下6大項指標進行測定評估，分析如下：

a.回收率：測定試劑盒對數據真實性的校準，過高或偏低會產生加樣和假性性的失準數據。

b.線性：測定試劑盒稀釋液與樣本微環(huán)境的的準確性，過高或偏低均會出現(xiàn)測定的偏差。

  2、精確度

a.板內精確度：評價單次實驗中，同一個已知濃度不同復孔的差異。

b.板間精確度：評價同一樣本，多次實驗的差異。

 3、精密度

檢測限：能顯著區(qū)分空白信號的最小信號值對應的濃度，用于評估試劑盒的靈敏度，值越低試劑盒靈敏度越高。

  4、特異性

a.交叉反應：評判特異性，不同分子與試劑盒抗體結合能力，交叉反應越大，特異性越差。

b.抗干擾能力：同源物的干擾，內源性物質對檢測系統(tǒng)的干擾。

  5.天然樣本檢測性

對天然樣本及合適的樣本類型檢測分析。對天然樣本類型確定，避免假陽性或假陰性結果。

  6、穩(wěn)定性

試劑盒時效性和穩(wěn)定性是對指標檢測的重要保障。穩(wěn)定性越高，試劑盒存儲時間越久。

ELISA的應用

ELISA技術是特定靶標蛋白質定量的金標準，提供快速，穩(wěn)定且易于分析的結果?？梢詫ι锎蠓肿?小分子的定量，對親和力測定評價或者篩選，還可對重組蛋白或細胞因子進行活性比對分析等運用。常應用于細胞因子，趨化因子，生長因子等檢測，同時應用于癌癥、干細胞、免疫學、神經學和信號轉導等研究領域的靶標。

ELISA實驗所用試劑-酶的底物與最后步驟詳解介紹！

1，酶的底物

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HRP的底物

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HRP催化過氧化物的氧化反應，代表性的過氧化物為H2O2，其反應式如下：DH2+ H2O2 D+ H2O

　　上式中，DH2為供氧體，H2O2為受氫體。在ELISA中，DH2一般為無色化合物，經酶作用后成為有色的產物，以便作比色測定。常用的供氫體有鄰苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS[2,2'-azino-di-(3-ethylbenziazobine sulfonate-6)]。

　OPD氧化后的產物呈橙紅色，用酸終止酶反應后，在492nm處有最高吸收峰，靈敏度高，比色方便，是HRP結合物的底物。OPD本身難溶于水，OPD·2HCL為水溶性。曾有報道OPD有致異變性，操作時應予注意。OPD見光易變質，與過氧化氫混合成底物應用液后更不穩(wěn)定，須現(xiàn)配置現(xiàn)用。在試劑盒中，OPD和H2O2一般分成二組分，OPD可制成一定量的粉劑或片劑形式，片劑中含有發(fā)泡助溶劑，使用更為方便。過氧化氫則配入底物緩沖液中，有制成易保存的濃縮液，使用時用蒸餾水稀釋。先進的ELISA試劑盒中則直接配成含保護劑的工作濃度為0.02% H2O2的應用液,只需加入OPD后即可作為底物應用液。

　　TMB經HRP作用后共產物顯藍色，目視對比鮮明。TMB性質較穩(wěn)定，可配成溶液試劑，只需與H2O2溶液混和即成應用液，可直接作底物使用。另外，TMB又有無致癌性等優(yōu)點，因此在ELISA中應用日趨廣泛。酶反應用HCL或H2SO4終止后，TMB產物由藍色呈黃色，可在比色計中定量，最適吸收波長為405nm。

ABTS雖不如OPD和TMB敏感，但空白值極低，也為一些試劑盒所采用。

　　另一種HRP的底物為3-(4-羥基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA]，經HRP作用后，產物顯熒光，可用熒光光度計測量。用于ELISA的優(yōu)點為可加寬定量測定的線性范圍。

　　HRP對氫受體的專一性很高，僅作用于H2O2、小分醇的過氧化物和尿素過氧化物(urea peroxide)。H2O2應用最多，但尿素過氧化物為固體，作為試劑較H2O2方便、穩(wěn)定。試劑盒供應尿素過氧化物片劑，用蒸餾水溶解后，在底物緩沖液中密閉、低溫（2～8℃）可穩(wěn)定1年。

豚鼠胃動蛋白2(GKN2) ELISA 試劑盒

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AP的底物

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　　AP為磷酸酯酶，一般采用對硝基苯磷酸酯(p-nitrophenyl phosphate,p-NPP)作為底物，可制成片劑，使用方便。產物為黃色的對硝基酚，在405nm波長處有吸收峰。用NaOH終止酶反應后，黃色可穩(wěn)定一時間。AP也有發(fā)熒光底物（磷酸4-甲基傘酮），可用于ELISA作熒光測定，敏感度較高于用顯色底物的比色法。

2，洗滌液

　　在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水。

3，　酶反應終止液

　　常用的HRP反應終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的最終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

4，陽性對照品和陰性對照品

　　陽性對照品(positive control)和陰性對照品(negative control)是檢驗試驗有效性的控制品，同時也作為判斷結果的對照，因此對照品，特別是陽性對照品的基本組成應盡量與檢測標本的組成相一致。以人血清為標本的測定，對照品最好也為人血清，因為正常人血清在各種ELISA模式中可產生不同程度的本底。由于大量正常人血甭較難得到，國外試劑盒中的對照品多以復鈣人血漿(recalcified human plasma)為原料，即在血漿中加入鈣離子，使其中的纖維蛋白質凝固，除去凝塊后所得的液體，其組成與血清相似。陰性對照品須先行檢測，確定其中不含待測物質。

例如HBsAg檢測的陰性對照品中不可含HBsAg，最好抗HBs也是陰性。陽性對照品多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質，其中加入一定量的待檢物質，此量最好在試劑說明書中標明。加入的量應與試劑的敏感度相稱，在測定中得到的吸光值與受檢標本吸光值比較，可對標本中受檢物質的量有一個粗略的估計。國外檢測HBsAg的ELISA試劑盒檢測敏感度約為0.5ng/ml，陽性對照品中含量約為10ng/ml。在對照品中一般加入抗生素和防腐劑，以利保存。

5，參考標準品

　　定量測定的ELISA試劑盒（例如甲胎蛋白質癌胚抗原測定等）應含有制作標準曲線用的參考標準品，應包括覆蓋可檢測范圍的4-5個濃度，一般均配入含蛋白保護劑及防腐劑的緩沖液中。