豚鼠淋巴細胞功能相關(guān)抗原2 ELISA 試劑盒 

實驗原理
   試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被ELISA試劑盒捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ELISA試劑盒呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
保存條件及有效期
1.本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中ELISA試劑盒的含量；
2.試劑盒保存：2-8℃；
3.有效期：6個月。

標(biāo)本的采集及保存
1.血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 
2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 
3.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 (注：標(biāo)本溶血會影響**檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。) 

 

  生化試劑在實驗中的存放，樣本要求
    有機剖析試劑有機剖析試劑是在無機物剖析中供元素的測定、別離、富集用的沉淀劑、萃取劑、螯合劑以及指示劑等專用的有機化合物，而不是指一般的溶劑、有機酸和有機堿等。這些有機試劑必需要具有較好的靈敏度和選擇性。
有機剖析規(guī)范品是測定有機化合物的組分和結(jié)構(gòu)時用作比照的化學(xué)試劑。其組分有必要準確已知。也可用于微量剖析。那么接下來一起看看化學(xué)試劑實驗室中寄存、運用要求有哪些:
*、歸于危險品類的化學(xué)藥品:
1.易爆和不穩(wěn)定物質(zhì)。如濃過氧化氫、有機過氧化物等。
2.氧化性物質(zhì)。如氧化性酸，過氧化氫也屬此類。
3.可燃性物質(zhì)。除易燃的氣體、液體、固體外，還包含在潮氣中會發(fā)生可燃物的物質(zhì)。如堿金屬的氫化物、及觸摸空氣自燃的物質(zhì)如白磷等。
4.有毒物質(zhì)。
5.腐蝕性物質(zhì)。如酸、堿等。
6.放射性物質(zhì)。
第二、實驗室試劑寄存、運用要求：
1.易燃易爆試劑應(yīng)貯于鐵柜中，柜子的頂部都有通風(fēng)口。嚴禁在實驗室寄存大于20L的瓶裝易燃液體。易燃易爆藥品不要放在冰箱內(nèi)。
2.彼此混合或觸摸后可以發(fā)生激烈反響、焚燒、爆破、放出有毒氣體的兩種或兩種以上的化合物稱為不相容化合物，不能混放。這種化合物系多為強氧化性物質(zhì)與還原性物質(zhì)。
3.腐蝕性試劑宜放在塑料或琺瑯的盤或桶中，以防因瓶子決裂形成事端。
4.要注意化學(xué)藥品的寄存的期限，一些試劑在寄存進程中會逐漸蛻變，甚至形成損害。
5.藥品柜和試劑溶液均應(yīng)防止陽光直曬及靠近暖氣等熱源。要求避光的試劑應(yīng)裝于棕色瓶中或用黑紙或黑布包好存于暗柜中。 


操作步驟
   實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 
1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。 為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準品溶液。 
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl標(biāo)記抗體加99μl標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。 
3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。

豚鼠淋巴細胞功能相關(guān)抗原2 ELISA 試劑盒 
1.用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
2.每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是加底物溶液及2N 。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。 
3.為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。 
4.未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于2-8℃保存。標(biāo)準品、標(biāo)記抗體工作液、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準品、標(biāo)記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。 
5.建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。 

洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。 
自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 

計算
   以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)），OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準物的濃度與OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 

注意事項
1.當(dāng)混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。
2.洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
3.一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標(biāo)準曲線，做復(fù)孔。
5.如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請乘以稀釋倍數(shù)。
6.在配制標(biāo)準品、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。
7.底物請避光保存。 
8.不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 

注意事項
     收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進行檢測的標(biāo)本，儲存在4 ℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本， 將標(biāo)本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2 -8 ℃可保存48 小時，-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標(biāo)本需添加
計算
     以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準物的濃度與OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 

試劑盒性能
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。
2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15% 

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