豚鼠補(bǔ)體成分5a(C5a) ELISA 試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒內(nèi)容物包括：

Vial 1：含有鈣，鎂，碳酸氫鹽和酚紅的EBSS溶液，此試劑的等分液用于重溶其他小瓶和制備稀釋的抑制劑溶液。

Vial 2：含有L-cysteine和EDTA的木瓜蛋白酶，每盒里包含5 × 100 unit可供一次性使用的小瓶。該試劑是0.22μm的膜過濾并在高壓滅菌瓶中凍干。用5ml EBSS溶液重溶(Vial 1)可得到每毫升 1mM的 L-cysteine和0.5mM EDTA中20units的木瓜蛋白酶溶液。

Vial 3：脫氧核糖核酸酶I (DNase I)，5×2000單位，每盒里包含5 × 100 unit可供一次性使用的小瓶。該試劑是0.22μm的膜過濾并在高壓滅菌瓶中凍干。用0.5ml EBSS溶液重溶(Vial 1)可得到每毫升產(chǎn)生2000units的DNase I溶液。

Vial 4：類卵母細(xì)胞蛋白酶抑制劑Ovomucoid protease inhibitor，每包1瓶，重溶后體積為32ml。

該試劑是0.22μm的膜過濾并在高壓滅菌瓶中凍干。用32ml的 EBSS溶液重溶(Vial 1)生成的溶液的有效濃度為每毫升10mg類卵母細(xì)胞抑制劑和10mg白蛋白。

神經(jīng)組織分離試劑盒（Papain Dissociation System）

Papain Dissociation System是基于美國(guó)科學(xué)家Huettner和Baughman對(duì)神經(jīng)細(xì)胞分離方法而研發(fā)出來的一套試劑（J. Neurosci., 6, 3044, 1986）。每個(gè)批次都在大鼠脊髓神經(jīng)細(xì)胞分離中進(jìn)行過性能測(cè)試，該試劑盒為每個(gè)實(shí)驗(yàn)提供新鮮制備的酶溶液。

該包裝包含足夠的材料分離5個(gè)獨(dú)立的組織等分體，每個(gè)高達(dá)0.3-0.4立方厘米。對(duì)于較大的組織樣本，在每個(gè)步驟中按比例準(zhǔn)備較大體積的試劑，并按協(xié)議中所述的相同比例將其組合。

試劑盒組成

豚鼠補(bǔ)體成分5a(C5a) ELISA 試劑盒

操作步驟

DNaseI通常有以下幾個(gè)用途：
1. 去除細(xì)胞培養(yǎng)過程中DNA的含量，可以降低黏度，因此獲得更多的細(xì)胞；
2. 用于生物過程中的DNA移除；
3. 在進(jìn)行RT-PCR前，除去RNA制劑中的基因組DNA；
4. 體外轉(zhuǎn)錄
5. Nick翻譯
6. DNase I足跡分析
7. 肌動(dòng)蛋白結(jié)合
8. 蛋白質(zhì)與核算的UV交聯(lián)
9. 放射性標(biāo)記

結(jié)果分析

1. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項(xiàng)

1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 濃度為 0 的標(biāo)準(zhǔn)品可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，終結(jié)果乘以5才是樣本終濃度。

4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

6. 若中英文說明書有誤，請(qǐng)以中文說明書為準(zhǔn)。

7. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

8. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。