豚鼠家族成員1B(TNFRSF1B) ELISA 試劑盒

本試劑僅供研究使用      

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>

本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中白介素6(IL-6)的含量。

實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人白介素6(IL-6)水平。用純化的白介素6(IL-6)捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入白介素6(IL-6)，再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素6(IL-6)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中白介素6(IL-6)含量。

試劑盒組成：

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

在網(wǎng)上如何才能找到好的ELISA試劑盒?
   現(xiàn)在生物科技日益日新月異的年代，像ELISA試劑盒產(chǎn)品形形色色品牌也許多，隨意在網(wǎng)上搜索下，就會(huì)出現(xiàn)許多關(guān)于ELISA試劑盒的公司，讓您眼花繚亂，那么怎么才能在網(wǎng)上找到ELISA試劑盒呢？

1、口碑與效勞也很重要：
       一個(gè)好的公司有必要要有好的口碑，公司BIM/RD/TSZ等試劑盒的口碑便是經(jīng)過(guò)客戶積累出來(lái)的。從現(xiàn)代營(yíng)銷觀念來(lái)說(shuō)，產(chǎn)品和效勞相輔相承，效勞既是產(chǎn)品的保證也是產(chǎn)品的延伸，超卓的效勞帶來(lái)了產(chǎn)品的增值和附加利益的滿意。我司用真摯的效勞不只贏得了客戶共同認(rèn)可也贏得了朋友。用戶的認(rèn)可就是我們的榮譽(yù)。

2、品牌很重要：
   挑選ELISA試劑盒品牌關(guān)于各位科研教師來(lái)講，仁者見(jiàn)仁智者見(jiàn)智，有的科研教師僅僅用某一種或某二種進(jìn)口的品牌，其他品牌一概不考慮；有的科研學(xué)者會(huì)測(cè)驗(yàn)是用各種不同品牌的ELISA試劑盒，再對(duì)其進(jìn)行比較，終究挑選某一個(gè)品牌的ELISA試劑盒進(jìn)行試驗(yàn)，本公司BIM/RD/TSZ等品牌ELISA試劑盒憑仗的技術(shù)和效勞根底，快速快捷的供貨系統(tǒng)，高效經(jīng)濟(jì)解決方案，受到廣闊科研者們的共同好評(píng)，成為敏捷興起的！

3、品質(zhì)很重要：
   每一位購(gòu)買產(chǎn)品的客戶都期望產(chǎn)品能好用，是正品，這個(gè)也是本公司一向以來(lái)堅(jiān)持的準(zhǔn)則，尋求，科學(xué)威望，一向以來(lái)是公司出產(chǎn)產(chǎn)品的行為準(zhǔn)則之一，對(duì)客戶擔(dān)任，對(duì)產(chǎn)品擔(dān)任，也是本公司一向堅(jiān)持的基本準(zhǔn)則，公司承諾：凡購(gòu)買我司ELISA試劑盒產(chǎn)品，如產(chǎn)品存在質(zhì)量問(wèn)題（非人為因素導(dǎo)致），可免費(fèi)包退換貨！讓廣闊科研用戶買的定心，用的安心！

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。

4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

9. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

豚鼠家族成員1B(TNFRSF1B) ELISA 試劑盒

計(jì)算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。樣本在使用前也要在室溫平衡60分鐘。

2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6. 底物請(qǐng)避光保存。

7. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

ELISA試劑盒運(yùn)用應(yīng)當(dāng)留心哪些事項(xiàng)
1、ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運(yùn)用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2、濃洗刷液可能會(huì)有結(jié)晶分出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗刷時(shí)不影響效果。
3、各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器，并常常校正其準(zhǔn)確性，以避免實(shí)驗(yàn)過(guò)失。一次加樣時(shí)刻最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，舉薦運(yùn)用排槍加樣。
4、請(qǐng)每次測(cè)定的一同做規(guī)范曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于規(guī)范品孔孔OD值的)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋必定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定，核算時(shí)請(qǐng)最終乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5、嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，ELISA試劑盒效果判定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
6、本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
7、封板膜只限一次性運(yùn)用，以避免穿插污染。
8、悉數(shù)樣品，洗刷液和各種廢棄物都應(yīng)按感染物處理。
9、底物請(qǐng)避光保存。

技術(shù)提示：

1、混合蛋白溶液時(shí)，避免起泡。

2、加校準(zhǔn)品與樣本時(shí)，每個(gè)校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染。

3、合適的溫育時(shí)間，和充分的洗滌步驟，是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。

4、底物溶液為無(wú)色液體，保存過(guò)程中變?yōu)樗{(lán)色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍(lán)色底物產(chǎn)物，會(huì)瞬間變?yōu)辄S色。

6、實(shí)驗(yàn)中，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)標(biāo)明的時(shí)間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作。

8、檢測(cè)必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。

試劑盒性能：

1. 樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

2. 批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15% 。

如何處理ELISA測(cè)定抗體疫苗之實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
        在ELISA試劑盒試驗(yàn)中我們總是碰到許多關(guān)于數(shù)據(jù)處理的難題，為了能我們更多更具體的了解在試驗(yàn)中數(shù)據(jù)處理的問(wèn)題，下面一起來(lái)看看ELISA測(cè)定抗體之怎么處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
        ELISA做得很好的話批間CV都要有10～15％左右，用同一個(gè)抗原，但對(duì)于包被的抗原濃度對(duì)OD的影響不是很大，只要不是不同太大即可?？寡瀹?dāng)然要用同一個(gè)稀釋度了。別的比較的話就必每批，每塊板上的樣品都要伴隨著一個(gè)參比品一同做，參比品仍是同一個(gè)這樣才干確保試驗(yàn)成果的可比性。
剖析：
（1）將同一只動(dòng)物免疫不同時(shí)刻后抗體產(chǎn)生的效價(jià)進(jìn)行比較。
（2）由上面能夠得出一組數(shù)據(jù)，舉個(gè)比如即如某個(gè)免疫間期抗體升高2倍的有多少，升高4，8，16...的各有多少，然后可知大多數(shù)情況下可升高多少，即此種升高率的陽(yáng)性率，然后再用泊松散布證明此陽(yáng)性率是否贊同整體在這個(gè)免疫間期增高的陽(yáng)性率，仍是由于隨機(jī)誤差的原因使試驗(yàn)得到了這個(gè)成果。
（3）計(jì)算出不同間期的效價(jià)水平后，能夠用方差剖析進(jìn)行整體比較，證明不同間期免疫的作用差異是否有計(jì)算學(xué)含義；然后再兩兩之間進(jìn)行比較，看免疫作用*顯著的是哪個(gè)間期。

保存條件及有效期：

1. 試劑盒保存： 2-8℃。

2．有效期： 6個(gè)月