犬誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(NOS2/iNOS)ELISA試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù),用合成的 HEV 多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型 HEV 毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框 2 和開放閱讀框 3 。將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在 HEV IgM 抗體,這些抗體就會與 HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人 IgM-HRP (辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會與第一次孵育結(jié)合上的 HEV IgM 抗體相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入 TMB 底物溶液,在第三次孵育時會發(fā)生酶 - 底物反應(yīng),只有那些含有 HEV IgM 抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),并在波長 : 450nm 處測量 O.D. 值 , 按照本 HEV IgM 抗體 elisa 試劑盒的測試標準 , O.D. 值大于或等于 Cut-Off 值的樣品被認為是初試陽性。

組成:

犬誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(NOS2/iNOS)ELISA試劑盒成分:

1 預(yù)包被板 : 抗小鼠白介素 -6 兔子 IgG, 親合純化 96T

2 酶標記抗體 : (30 倍濃縮 )HRP 標記抗小鼠白介素 -6 兔子 IgG, 親合純化 0.4mL x 1

3 標準品 : 重組小鼠白介素 -6 0.5mL x 2

4 EIA 緩沖液 : 含 1% BSA, 0.05% 吐溫 20 BPS 30mL x 1

5 標記抗體稀釋液 : 含 1% BSA, 0.05% 吐溫 20 BPS 12mL x 1

6 顯色劑 : TMB 底物液 15mL x 1

7 終止液 : 1N 硫酸 12mL x 1

樣本處理
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天就進行檢測的樣本,及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?span>,有條件的也可以-70℃凍存?zhèn)溆?。標本?yīng)避免反復(fù)凍融。
液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
1.血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
2.血漿:
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
3.尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦眷液參照此實行。
4.細胞培養(yǎng)上清,
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。5.培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/m!左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。6.組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氨迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

試驗原理:已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
elisa試劑盒安全性:
1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。