實驗原理

1. 抗體或抗原的吸附：將待測抗原或抗體吸附到固相載體上，常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團，能夠與待測抗原或抗體特異性結(jié)合。

2. 酶標記的抗體或抗原的結(jié)合：將酶標記的抗體或抗原與待測抗原或抗體結(jié)合，形成酶標記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力，能夠與待測抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。

3. 底物顯色反應(yīng)：當(dāng)酶標記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時，酶能夠催化底物分解，產(chǎn)生顏色變化。通過測量顏色的變化程度，可以判斷待測抗原或抗體的濃度。

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T（可拆）

產(chǎn)品數(shù)量：咨詢

產(chǎn)品應(yīng)用：ELISA實驗

產(chǎn)品貨期：現(xiàn)貨

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71) ELISA 試劑盒

實驗步驟

1. 準備試劑盒：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘以上，使試劑盒恢復(fù)至室溫。

2. 加樣：分別向各孔中加入標準品、待測樣本和空白孔，每孔加入50μl。

3. 孵育：用封板膠紙封住反應(yīng)孔，輕輕振蕩混勻，37℃孵育1小時。

4. 洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌4-5次，每次30秒。

5. 加酶標二抗：每孔加入50μl酶標二抗溶液，輕輕振蕩混勻，37℃孵育30分鐘。

6. 洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌4-5次，每次30秒。

7. 加底物：每孔加入50μl底物溶液，輕輕振蕩混勻，37℃孵育15-20分鐘。

8. 終止反應(yīng)：每孔加入50μl終止液，輕輕振蕩混勻。

9. 讀數(shù)：用酶標儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值。

驗注意事項

1. 保證試劑盒的質(zhì)量：選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的試劑盒，確保試劑盒的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

2. 嚴格控制實驗條件：實驗過程中要嚴格控制溫度、pH值、離子強度等條件，以保證實驗結(jié)果的準確性。

3. 避免交叉污染：實驗過程中要避免交叉污染，確保每個步驟使用的試劑和材料都是清潔無污染的。

4. 標準化操作：實驗操作要標準化，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，避免人為誤差對實驗結(jié)果的影響。

5. 定期校準：定期對實驗儀器進行校準，確保儀器的準確性和穩(wěn)定性。

6. 保存好實驗數(shù)據(jù)：實驗過程中要保存好實驗數(shù)據(jù)，以便后續(xù)分析和處理。

試劑盒會出現(xiàn)的問題及解決辦法

1. 加入反應(yīng)終止液后，沒有吸光值或吸光值偏低。

a.原因：未加入酶標記物。

解決辦法：請按照操作步驟進行。

b.原因：試劑盒內(nèi)容物未能充分回。

解決辦法：確定試劑盒內(nèi)容物回溫后再進行操作。

c.原因：室溫太低。

解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請于操作步驟4，適當(dāng)延長溫育時間。

d.原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。

解決辦法： 請用試劑盒內(nèi)所提供的清洗液清洗。

e.原因：試劑盒已過有效期限。

解決辦法：請更換成仍在有效期限內(nèi)的試劑盒。

2. 標準曲線線性不佳，或是平行性不好。

a.原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

解決辦法： 請確認溫育位置既不透光也不透風(fēng)(如抽屜內(nèi))。

b.原因：操作時間拖太久。

解決辦法：請在方法熟練后再進行操作。

c.原因：微孔間相互污染。

解決辦法： 加樣品時，請小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

d.原因：標準品或酶標記物所加入的量不一致。

解決辦法：請使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。

e.原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確。

解決辦法：加樣品或試劑時，吸頭請勿接觸微孔。

f.原因：洗板過程發(fā)生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進行下一步驟)。

解決辦法：請隨時監(jiān)控洗板機洗板過程，洗完后立即進行下一步驟。

3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

a.原因：室溫太高(>25℃)。

解決辦法： 若無法降低室內(nèi)溫度，請適當(dāng)縮短步驟4的溫育時間。

b.原因：底物溶液受到污染。

解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍色，請不要再使用。

c.原因：反應(yīng)時間超過太久。

解決辦法：請控制反應(yīng)時間。

d.原因：酶標記物污染了盒內(nèi)其它試劑。

解決辦法：使用過的吸頭應(yīng)立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應(yīng)立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)

4. 陰性標準品的吸光值低于陽性標準品的吸光值。

a.原因：微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法： 試劑加完后，需輕敲盤四周使其充分混合均勻。

b.原因：洗板過程發(fā)生問題(同2-f.)。

解決辦法：請參考2-f.

c.原因：添加樣品或酶標記物的量不一致。

解決辦法： 請參考2-d.

人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71) ELISA 試劑盒

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