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簡要描述:猴血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒高質(zhì)量優(yōu)化的篤瑪生物ELISA試劑盒使您能夠從容、可靠和一致地測量靶標特異性蛋白質(zhì)??商峁┒喾N ELISA試劑盒規(guī)格,包括完整的、即用型試劑盒以及可DIY預(yù)優(yōu)化試劑。ELISA試劑盒和抗體對可用于一系列不同的物種,包括人類、小鼠、大鼠、非人類靈長類、犬、豬、牛、馬。
猴血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒
本試劑盒基于檢測樣本的特異性抗體包被酶標板,加入待測樣本,樣本與包被在酶標板上的特異性抗體結(jié)合,形成免疫復(fù)合物。清洗后加入酶標二抗,與免疫復(fù)合物結(jié)合,形成完整的三明治復(fù)合物。再加入底物溶液,底物在酶的作用下變色,顏色的深淺與樣本的濃度呈正相關(guān)。最后加入終止液,使反應(yīng)停止,在450nm波長下測量各孔的光密度值(OD值),通過標準曲線計算樣本的濃度。
檢測前準備工作:
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過50℃,使用時洗滌液應(yīng)為室溫)。當日使用。
3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘,加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為8000pg/mL)。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋(注:不要直接在反應(yīng)孔中進行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例 標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標準品:取0.5mL10ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。
4. 生物su化抗體工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以生物su化抗體稀釋液稀釋濃縮生物su化抗體(1:100)成工作濃度。當日使用。
5. 酶結(jié)合物工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。
當日使用。
實驗步驟
1. 樣品收集與處理
(1)根據(jù)需要收集不同種類的樣品,如血清、血漿、尿液等。
(2)對于血清和血漿樣品,將采集的血液靜置一段時間后,離心分離出血清或血漿。
(3)對于尿液樣品,收集尿液后,可直接進行檢測。
2. 樣品稀釋
根據(jù)試劑盒說明,對需要稀釋的樣品進行適當比例的稀釋。
3. 加樣
(1)按照試劑盒說明,分別將標準品、質(zhì)控品和待測樣品加入相應(yīng)的孔中。
(2)每孔加入50μL,輕輕震蕩混勻。
4. 封閉
根據(jù)試劑盒說明,加入適量的封閉液,覆蓋板孔,并輕輕震蕩混勻。封閉液一般為含有一定濃度的非特異性結(jié)合配體的溶液,可以降低非特異性結(jié)合的影響。
5. 洗滌
(1)將板孔洗滌液加入到每個孔中,輕輕震蕩,然后倒掉洗滌液。重復(fù)洗滌3次,每次用洗滌液充分洗滌
(2)最后一次洗滌后,用紙巾輕輕吸干板孔表面的水分。
6. 酶標二抗加入及孵育
(1)根據(jù)試劑盒說明,將酶標二抗加入相應(yīng)的孔中。
(2)孵育一定時間后,將板孔中的溶液倒掉。
7. 洗滌與顯色
(1)重復(fù)步驟5的洗滌過程。
(2)加入顯色劑,孵育一定時間后,將板孔中的溶液倒掉。
8. 終止反應(yīng)與讀數(shù)
(1)加入終止液,終止酶促反應(yīng)。
(2)用酶標儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值(OD值)。
結(jié)果判斷
繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應(yīng)OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8℃,使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為 0 的標準品可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋 5 倍,終結(jié)果乘以5才是樣本終濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
6. 若中英文說明書有誤,請以中文說明書為準。
7. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按 1:20 稀釋,即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
8. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
猴血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒
免責(zé)聲明
試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或生物體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔(dān), 本公司概不負責(zé)。
嚴格按照說明書操作,不同批號不可交換使用,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔(dān)。
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